核酸银染试剂盒
保存条件:常温保存,保质期 1 年。
产品内容:
产品说明:分子生物学实验中,常利用银染的方法显示聚凝胶或者琼脂糖凝胶中的核酸条带,其检测原理是:银离子(Ag
+)可与核酸形成稳定的复合物,随后 Ag+在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒,后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比 EB 高达 200 倍,常用于检测 SSR 标记、SNP 标记等。
一 准备工作
1. 核酸 PAGE 银染试剂盒共可配制染色液和显色液分别 1L/5L。根据操作步骤估算所需染色液和显色液体积。染色液和显色液均需按以下比例新鲜配置。
2. 染色液配置比例:(100mL 染色液)
100mL 染色液=1mL 染色试剂 A+10mL 染色试剂 B+10mL 无水乙醇+79mL 去离子水。
3. 显色液配置比例:(100mL 显色液)
100mL 显色液=0.5mL 显色试剂 C+10mL 显色试剂 D+89.5mL 去离子水。
二 操作步骤(预览操作步骤,估算工作液使用量,新鲜配置工作液之后开始染色步骤)
1. PAGE 电泳结束后,将 PAGE 胶转移到装有去离子水的瓷盘中,漂洗,共 2 次,2min/次。
2. 将 PAGE 胶转移到适当体积的染色液中,使染色液在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE 胶。室温染色(40-60 rpm)10min。
3. 倒掉染色液,用去离子水快速漂洗 2 次,每次 30 秒。
4. 将 PAGE 胶转移到适当体积的显色液中,使显色液在轻柔摇晃过程中能够淹没 PAGE 胶。室温摇晃(40-60 rpm)直到颜色显现,一般需要 10min 左右。
5. 将 PAGE 胶置于适当背景下照相。
三 注意事项
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 银染主要出现在 PAGE 胶的表面,因此该方法更适合用于薄胶(0.5-0.75mm)的检测。
3. 水质对银染影响很大,最好用双蒸水或去离子水。
4. 装胶的器皿清晰干净,双蒸水多冲洗几遍。
5. 操作时戴手套,不然胶上会有大手印。
6. 跑胶时建议采用大梳子,小样本量。因为银染分辨率就很高,小梳子的条带比较模糊,样本量太大时杂带太浓。
7. 显色后尽快照相。凝胶随着时间逐渐变黄,条带越来越浓,杂带逐渐显现。时间拖得越久,片子越难看。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!