沉淀法质粒大提试剂盒（沉淀法）

沉淀法质粒大提试剂盒（沉淀法）

储存条件：常温保存，保质期 1 年。RNase A 溶液 4 ℃保存。

产品简介：

本试剂盒采用独特的缓冲系统，结合传统的异丙醇沉淀方法，可快速地获得大量高纯度的质粒 DNA。

使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。

产品内容：

注意事项：

a.裂解液 II 如有沉淀，37 ℃水浴溶解后使用。

b.裂解液 II 含 NaOH，使用后请及时拧紧瓶盖，防止变质。

c.RNase A 溶液，4 ℃保存 6 个月有效，-20℃可长期保存。

d.第一次使用时，将试剂盒所带的 RNase A 加入悬浮液 I 中，之后置于 4 ℃保存。

e.纯化液 III 请置于 4 ℃冰箱预冷

操作步骤：

细胞裂解

1. 离心收集 50-200 mL 过夜培养的细菌，室温 10,000 rmp 离心 5min（或 5,000 rmp 离心 10 min）。

2. 向菌体沉淀中加入 10 mL 悬浮液 I，使用移液器吹打沉淀彻底混匀，静置 3-5 min。

3. 向上述混合液中加入 10 mL 裂解液 II，立即温和上下颠倒离心管 6-8 次，室温静置 5-10 min 左右至混合液变清亮，请勿静置过长时间。

注意：为避免基因组 DNA 污染和质粒断裂，请勿剧烈震荡离心管，请勿静置超过 10 min。

4. 加入 10 mL 预冷的纯化液 III，立即温和上下颠倒离心管 6-8 次，冰上静置 10 min。4 ℃ 10,000 rpm 离心 15 min（或 5,000 rmp 离心 30 min）。

质粒 DNA 纯化

1. 将上述离心后的上清液用推杆型过滤柱过滤，并转移到新的 50 mL 离心管中。

2. 在过滤后的上清中加入 20 mL 异丙醇，上下颠倒充分混匀，室温放置 10 min。

3. 4 ℃ 10,000 rpm 离心 15 min（或 5,000 rmp 离心 30 min）。小心倒掉上清液（请勿触及离心管壁白色沉淀）并倒置在吸水纸上。

4. 在室温下用 5 mL 70%乙醇涮洗管壁，10,000 rpm 离心 5 min，小心倒掉上清液（请勿触及离心管壁白色沉淀，如果白色沉淀脱落，可以再次离心），倒置于吸水纸上轻轻沥干残余液体。

5. 用 0.5-1.5 mL TE 溶解 DNA 沉淀，琼脂糖凝胶电泳检测。长期保存请置于-20 ℃。

质粒 DNA 浓度及纯度检测：

得到的质粒 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为多条带，这些条带是质粒的多聚体造成的，不影响后续的酶切、转染等实验。OD₂₆₀值为 1 相当于大约 50 μg/mL 双链DNA。

纯化的质粒DNA OD₂₆₀/OD₂₈₀通常在 1.8-2.0 左右，可直接应用于分子生物学等常规操作。如果溶解时不使用缓冲液，而使用 ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！