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文献和实验入20.9g MOPs,放在磁力搅拌器上溶解。再加1.86g EDTA二水二钠,放在磁力搅拌器上溶解。用1M灭过菌的NaOH 调PH至7.0(约用NaOH 40ml),用DEPC 处理过的去离子水定容至500ml,装入棕色瓶中,写好标签,室温避光保存。4、5 × 甲醛变性胶加样缓冲液(5×loading buffer): 配制10ml。预先配制水饱和的溴酚蓝溶液:在1.5ml 离心管中加入约0.1mg溴酚蓝,加入1ml DEPC水溶解,充分振荡溶解,离心,可见离心管底部有溴酚蓝粉末剩余,上层液体
、无 DNA 酶、无热原和 ATP 污染。 通常客户习惯自己去高温高压灭菌,但是高温高压灭菌过的吸头是不能完全保证去除生物污染。我们以「热原」举例,热原的耐热性能良好,180℃ 3~4 小时、200℃ 60 分钟或 250℃ 30~40 分钟方可使热原彻底破坏,而常规高温湿热灭菌 121℃ 30 分钟无法破坏热原活性。而且热原在日常环境中,甚至空气中随处存在,极易污染。 因此,要确保生物洁净需要在吸头生产过程中严格控制生物污染。具体可以从下面三方面考虑: 1、吸头原材料纯净无添加;
RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上,现有的 RNA 抽提方法/试剂,如果用于从培养细胞中抽提 RNA,比抽提基因组 DNA 更方便,成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提,总会碰到问题呢? RNase 真的很顽固吗? 刚涉及 RNA 抽提的新手都会听到别人说 RNase 很顽固,用高压灭菌都无法去除其活性。于是在配制 Tris 缓冲液时就遇到了两难的境地。Tris 缓冲液不能用 DEPC 处理,只能用 DEPC 处理过的水配制
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