- ￥338
- 博尔森/BIOESN
- BES20368KB
- 中国
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
AGL1 Chemically Competent Cell
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
10×100μL
AGL1感受态细胞
储存条件：-80 ℃（12 个月）
产品规格：100 μL/支
基因型：C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine
产品说明：
AGL1 菌株为 C58, RecA 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif 和羧苄青霉素抗性基因 carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型 Ti 质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有 vir 基因（vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移）。AGL1 菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。
使用方法：
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每 100 μL 感受态加入 0.01-1 μg 质粒 DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 5 min、液氮 5 min、37℃水浴 5 min、冰浴 5 min。
3. 加入 700 μL 无抗生素的 LB 或 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 h。
4. 6000 rpm 离心 1 min 收菌，留取 100 μL 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天。
注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于 25 μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti 质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti 质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6. 不适用于氨苄青霉素抗性质粒。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB（50 mL）/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT，其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl，在30℃下培养。3. 大约3 h，OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀，吸取
野生型 E.coli 并不容易转化，这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源 DNA 。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源 DNA 的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对 DNA 的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外 DNA 重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（ natural transformation
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