- ￥2000
- 吉赛生物
- R0402
- 2025年07月16日
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
产品简介
本试剂盒利用重组T7 RNA聚合酶，以Biotin-NTP Mix为底物，在体外快速高效合成含生物素标记的RNA。合成的生物素标记RNA可用于RNA Pull-down、Northern Blot、原位杂交等实验。使用1 μg DNA模板时，每次反应中RNA生成量不低于50 μg。
产品组分
| 组分 |
R0402 (3 rxns) * |
| T7 RNA Polymerase Mix |
4.75 μL |
| T7 Reaction Buffer |
4.75 μL |
| Biotin-NTP Mix ** |
20 μL |
| RNase-Free DNase I (1 U/μL) |
6.3 μL |
| 10× DNase Reaction Buffer |
30 μL |
| RNase-Free Water |
300 μL |
*：使用20 μL体系时，本试剂盒可进行3次转录反应。
**：Biotin-NTP Mix内含ATP, GTP, CTP, UTP和Biotin-16-UTP，其中UTP与Biotin-16-UTP的比例为2:1。
保存条件
低温运输，-20℃保存，保质期12个月。
自备材料
1. RNA纯化回收：TRIzol LS Reagent、磁珠或过柱纯化试剂盒。
2. RNA检测：微量分光光度计、Qubit荧光计、琼脂糖凝胶电泳设备或Agilent 2100等。
3. 其他试剂与耗材：RNase-Free或DEPC处理的PCR管和吸头等。
操作流程
-
DNA模板制备
使用含有T7启动子序列的线性化质粒、PCR产物或合成的寡核苷酸为模板，模板应保证高纯度高质量，避免RNase、蛋白质、RNA或盐类污染。
以线性化质粒为模板的，应使质粒线性化形成平末端或5’突出末端，线性化后应进行琼脂糖凝胶电泳检测，确保线性化切割完全，并纯化回收。在20 μL反应体系中，线性化质粒模板可使用0.5~1 μg。
以PCR产物为模板的，可在引物上加入T7启动子序列进行PCR扩增，确保T7启动子序列的方向正确。PCR产物应进行琼脂糖凝胶电泳检测，确保条带单一且大小正确，并纯化回收。在20 μL反应体系中，PCR产物模板可使用0.2~0.75 μg。
2. RNA转录合成
1) 从试剂盒中取出各组分试剂，冰上融化颠倒混匀，短暂离心后置于冰盒上备用。
2) 按照下表依次添加试剂，配置反应体系。
表1 RNA转录合成的反应体系
| 组分 |
用量 |
| RNase-Free Water |
Up to 20 μL |
| T7 Reaction Buffer |
1.5 μL |
| Biotin-NTP Mix |
6.5 μL |
| DNA模板 |
X μL (线性化质粒0.5~1 μg，PCR产物0.2~0.75 μg) |
| T7 RNA Polymerase Mix |
1.5 μL |
3) 颠倒混匀并短暂离心，置于PCR仪上37℃孵育2 h。合成小于300 nt的短链RNA时应37℃孵育4~16 h。
3. DNA模板去除
向反应液中依次添加68 μL RNase-Free Water，10 μL 10× DNase Reaction Buffer，和2 μL RNase-Free DNase I (1 U/μL)，置于PCR仪上37℃孵育15 min。
4．纯化回收
使用TRIzol LS Reagent、磁珠或RNA柱纯化试剂盒，纯化回收生物素标记的RNA。
5．RNA检测
1) 定量检测
使用微量分光光度计（如Nanodrop）或Qubit荧光计检测RNA的浓度和纯度。
2) 电泳检测
使用琼脂糖凝胶电泳或Agilent 2100检测RNA的大小和完整性，生物素标记的RNA分子量增大，条带大小可能比预期偏大。使用非变性琼脂糖凝胶电泳时，可以先将RNA置于65℃孵育10 min，再上样检测。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验生成全长转录组 使用 Ambion 转录试剂盒合成的大多数 DNA 模板都可以生成全长转录组，无需任何优化。然而，一些模板可能产生过早终止的产物，如较小的离散带或拖尾/降解产物。对于印迹杂交，通常不需要全长 RNA 探针。然而，对于许多其他分析，至关重要的是转录进行到模板的末端，全部生成同一种大下的转录组（例如 NPA，体外翻译研究和结构分析）。转录反应失败或不良的两个最常见因素是标记核苷酸中的抑制剂和质量较差的 DNA 模板。应执行一系列简单的实验来确定转录反应失败的原因；随附的流程图概述
Kit(Cat.No.900182,10次标记)，通过试剂盒提供的生物素标记的核糖核酸和T7 RNA聚合酶，以体外转录（IVT）的方式扩增并标记cRNA探针。试剂盒提供体外转录和标记的所有试剂，可以作10个反应。标记好的探针经过随机片断化（fragmentation，试剂自行配制）后得到大小约为35-200个碱基大小的RNA片断即可和芯片进行杂交。 2）Affymetrix公司的Genotyping（如人类SNP图谱分析芯片）和健康研究芯片： 这一类芯片用于检测样品基因组的变异，因而只需纯化基因
的，PAGE胶纯化的引物在这里不适用）作为逆转录引物合成cDNA。由于引物中带有T7序列，因此合成的cDNA的3'端也带有T7序列。选用Affymetrix公司提供的Enzo BioArray HighYield RNA Transcript Labeling Kit（Cat. No. 900182，10次标记），通过试剂盒提供的生物素标记的核糖核酸和T7 RNA聚合酶，以体外转录（IVT）的方式扩增并标记cRNA探针。试剂盒提供体外转录和标记的所有试剂，可以作10个反应。标记好的探针经过随机片断
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
