- ￥7445
- roche
- 11745824910
- 2026年03月30日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
见产品外包装
- 英文名：
Biotin-Nick translat.mix f.in
- 库存：
需确认
- 供应商：
嵘崴达
- CAS号：
见产品外包装
- 保存条件：
−20°C
- 规格：
160 μL
生物素标记缺口转录混合物
别名:
nick translation
一般描述
便捷式酶和和核苷酸混合物。
缺口转录利用DNA酶和DNA聚合酶组合切割DNA螺旋的一条链，然后在聚合酶检测或“校对”缺口位点时掺入标记的核苷酸。生物素-16-dUTP与dTTP的摩尔比经过调整，可确保新合成DNA中的每20 至25 个核苷酸被生物素修饰。DNA中的半抗原密度可在免疫学检测反应中产生最高的灵敏度。
该方法常使用大质粒、粘粒和PCR片段，DNA可以线性的或超螺旋的。各模板在标准90分钟反应中产生一致的结果，得到的平均探针长度为200个碱基对，最长达到500个碱基对。
特异性
热灭活：通过添加1 μl 0.5 M EDTA (pH 8.0)、加热至65 °C并维持10分钟来终止反应。
应用
生成用于生物素-16-dUTP标记的 原位 杂交的高灵敏度探针。
注：该混合物也可用于过滤杂交技术，但是，对于高灵敏度过滤杂交探针，我们建议使用Roche Applied Science的Biotin-High Prime。
对于使用其他半抗原对 原位 探针进行非放射性标记，Roche Applied Science提供 DIG-缺口转录混合物或缺口转录混合物。
质量
已通过斑点杂交试验测试功能。
原理
缺口转录方法是基于DNase I能够在MgCl2存在时，在低酶浓度条件下在DNA上随机产生缺口。大肠杆菌DNA聚合酶I利用缺口的3′-OH末端作为引物，以5′?3′方向合成与完整链互补的DNA。DNA聚合酶I的5′ → 3′核酸外切活性能同时去除合成方向上的核苷酸。聚合酶活性用同位素标记的或半抗原标记的脱氧核糖核苷三磷酸依次替换去除的核苷酸。在低温（+ 15℃）条件下，反应中未标记的DNA被新合成的标记DNA取代。
外形
1小瓶，含5倍浓缩溶液，50％甘油（v/v）稳定反应缓冲液以及DNA聚合酶I和DNase I，0.25mM dATP，0.25mM dCTP，0.25mM dGTP，0.17mM dTTP和0.08mM生物素-16-dUTP。
| 11745824910 | Biotin-Nick translat.mix f.in | 160 µl (40 labeling reactions) |
| 11534378910 | Tetramthylrhodamin-5-d-UTP, So | 25 nmol (25 µl) |
| 10881775001 | RNA Polymerase, T7, 5000 U T7 RNA聚合酶 | 5,000 U |
| 11031171001 | RNA Polymerase, T3, 5000 U T3 RNA聚合酶 | 5,000 U |
| 3353575910 | DIG Oligo 3'-End Lab. Kit,2nd | 1 kit (25 labeling reactions) |
| 10481238001 | pBR322 DNA (1 A260 unit) | 200 µl (1 A260 unit) |
| 11388908910 | Biotin-16-UTP | 250 nmol (25 µl) |
| 11745816910 | DIG-Nick translat.mix f.in sit | 160 µl (for 40 labeling reactions) |
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文献和实验（通常是含有转录因子结合位点的启动子序列）相互作用的调控蛋白/转录因子，获得目的基因的启动子序列后，使用该方法可以筛查48/96种常见的调控蛋白/转录因子与启动子序列结合情况。该方法利用转录因子与特定DNA序列结合的特点，针对每一种转录因子设计相应的生物素标记探针；当混合探针与核蛋白样本共同孵育时，探针与相应的转录因子结合形成转录因子/探针复合物；除去游离的探针，收集转录因子/探针复合物；分离复合物中的DNA探针，探针的量与转录因子含量呈正相关。在探针混合物中同时加入启动子片段，如果DNA序列中含有
为模板时，必须采用反转录酶，得到的产物是标记的单链cDNA探针。随机引物法标记的探针比活性高，但标记探针的产量比缺口平移法低。DNA探针的随机引物法标记原理图
缺口平移法探针标记 探针的标记方法很多，大致可以分为两大类：引入法和化学修饰法。引入法是运用标记好的核苷酸来合成探针，即先将标记物与核苷酸结合，然后通过DNA聚合酶、RNA聚合酶及末端转移酶等将标记的核苷酸整合入DNA或RNA探针序列中去。化学修饰法即采用化学方法将标记物掺入已合成的探针分子中去，或改变探针原有的结构，使之产生特定的化学基团。引人法较化学修饰法更常用．按其整合的方法不同?引入法可分为缺口平移法、随机引物法、末端标记法和PCR扩增标记法和RNA体外转录法等。 缺口
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