- ￥338 - 578
- 博尔森/BIOESN
- BES20073KB
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
2.5M 3-AT Solution
- 保质期：
24个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
5×5mL /100mL
| 规格： | 5×5mL | 产品价格： | ￥338.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥578.0 |
2.5M 3-AT溶液（过滤除菌）
保存条件：-20℃储存，有效期 18 个月。
包装内容：
产品简介：
HIS2 作为报告基因时，会有一定程度的泄漏性表达，出现背景过高的现象，一般称作自激活。这时可以在筛选培养基中加入适量的 HIS2 竞争性抑制剂 3-AT（3-amino-1,2,4-triazole），以降低背景；或者增加一个筛选标记 Ade 来进行更加严格的筛选。加入的 3-AT 浓度过高，蛋白间比较弱的相互作用也可能被抑制，因此需要筛选确定 3-AT 的最适浓度。
3-AT 溶液为经过过滤除菌的即用型母液，用于酵母杂交实验抑制本底表达，用以准确筛选出蛋白互作引发的 His 的报告基因的表达。
使用方法：
1. 计算所需平板的数量，计算配置培养基体积；
2. 设置 3-AT 的浓度梯度（建议 10-50 mM 的浓度范围设 3-5 个梯度，常用浓度约 30 mM）；
3. 灭菌筛选培养基，待培养基冷却到 55 ℃左右，加入 3-AT 母液，摇匀后倒板；
4. 标记每个平板的 3-AT 浓度，超净台冷却凝胶后，按单位面积单个克隆计算培养物浓度，涂板；
5. 28-30 ℃培养 3-5 天，筛选出最佳 3-AT 浓度，用于后期互做筛选。
注意：
1. 理想情况 10 mM 浓度的 3-AT 平板会有少量生长，20 mM 浓度的 3-AT 不能或极少生长。如果在 80 mM浓度的 3-AT 平板上生长酵母，说明自激活活性太高，不能用于双杂交筛选。
2. 诱饵蛋白能够单独激活报告基因的表达，该蛋白如果是具有转录激活域一个转录因子，需要去掉转录激活结构域。如果不是转录因子但仍具有较强的转录激活活性，需要将诱饵蛋白具有激活活性的区域去除，但这样操作有可能影响蛋白间的互作。
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文献和实验0.5M EDTA FW M L pH8.0 xg = 292.25 0.5 0.5 **93.06g** Add to about 300mls H2 O while spinning
、培养液等。目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。滤膜孔径应在0.22～0.45 μm范围内或用更小的细菌滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用，阻制小于滤膜孔径的细菌透过。5．化学消毒剂消毒法用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、高锰酸钾、70%～75%乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75
的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。 二、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml) HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。 三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制 将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g
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