BenzoNuclease

目录号：M056-01A

 

产品描述:

BenzoNuclease是来源于Serratiamarcescens的非特异性核酸内切酶。利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得，蛋白不带有任何形式标签。该酶具有降解任意形式的DNA和RNA活性，包括双链、单链、线状、环状等，可将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸。

 

产品用途：

1）蛋白提取时去除核酸污染；

2）蛋白纯化过程中去除核酸污染；

3）疫苗及制药工业中去除宿主残留核酸；

4）Western-blot；

5）IP-Western。

 

使用建议：

最适温度：37℃ ；最适pH：pH8.0 

 

反应条件：

BenzoNuclease的反应条件非常广泛：Mg²⁺浓度：1–10 mM；pH：6.0–10.0；温度：0–42°C；Dithiothreitol：0–100 mM；2-mercaptoethanol：0–100 mM；Monovalent cation concentration (Na+, K+, etc.)：0–150 mM。

 

 

应用实例：                                                                          

图例一）在20μl体系中，在37℃，30min条件下，1U BenzoNuclease消化不同形式DNA的结果。 

                                                                            

泳道M：DNA   Ladder 2000；

泳道1：Lambda/HindIII；                                 泳道2：Lambda/HindIII   + 1U BenzoNuclease；

泳道3：ECorI和SalI酶切的Puc19片段；        泳道4：ECorI和SalI酶切的Puc19片段+   1U BenzoNuclease；

泳道5：Puc19质粒；                                        泳道6：Puc19质粒+   1U BenzoNuclease；

泳道7：pBAD质粒；                                       泳道8：pBAD质粒+   1U BenzoNuclease；

泳道9：Lambda   DNA；                                 泳道10：Lambda   DNA+ 1U BenzoNuclease；   

泳道11：800bp 的PCR产物；                         泳道12：800bp 的PCR产物+ 1U BenzoNuclease

 

保存温度：

       -20℃

 

质量保证：

经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达90%，PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。 

 

活性定义：

一个活性单位指在2.625 ml体系中， 37℃，pH8.0条件下，30分钟内使△A260降低1.0（相当于完全消化37μg DNA）所需要的酶量。

 

失活条件：

1）   100mM NaOH，70℃处理30分钟可使BenzoNuclease完全失活；

2）   采用EDTA 螯合金属离子会可逆地抑制BenzoNuclease部分活性；

3）   在95℃, 5min会抑制BenzoNuclease部分活性；

4）   在-70℃，＞48h，可使1U/ul的BenzoNuclease失活。 

 

保存体系：

20mM Tris-Cl，2mM MgCl2，2mM NaCl，50% GlycerolGlycerolGlycerolGlycerolGlycerolGlycerol Glycerol，pH8.0。

 

注意事项：

1）不可长期保存在–70°C，超低温使BenzoNuclease失活；   

2） BenzoNuclease的活性需要1-2mM Mg²⁺。而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20mM，硫酸铵浓度>25mM等情况下，BenzoNuclease的活性会降低50%。