- ￥900
- YLKBIO
- YLK-ZL0021
- 国产
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pTRE3G
- 保质期：
90天
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
质粒干粉
产品名称：pTRE3G质粒
产品规格：质粒干粉
有效期：90天，请尽快转化。
保存温度：一般在-20℃，置于-80℃保存时间更长。
运输方式：常温运输，1周内。
应用领域：宿主：哺乳动物 用途：蛋白表达
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，3431bp ,启动子:TRE3G 复制子:pUC ）
注意事项：转化前请准确查找该质粒相应的抗性、感受态和培养温度。（请向客服QQ索要质粒信息目录）
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
pTRE3G质粒培养基：LB+50mcg/ml氨苄青霉素：酵母膏 5.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，蒸馏水 1.0L，pH 7.0。121℃，15min灭菌。灭菌结束后，培养基冷却至40-50℃时加入氨苄青霉素，浓度50mcg/ml。
| pENTR223-PFDN2人源基因质粒 |
| pENTR223-HSP90AB1人源基因质粒 |
| pENTR223-AFAP1人源基因质粒 |
| pENTR223-CARF-T1395G人源基因质粒 |
| pENTR223-ANAPC5-C5G人源基因质粒 |
| pENTR223-CFAP47（1-1899bp）人源基因质粒 |
| pENTR223-STAT5A人源基因质粒 |
| pENTR223-PRDM4人源基因质粒 |
| pENTR223-NGEF人源基因质粒 |
| pENTR223-MAP7（1点突变2同义突变）人源基因质粒 |
| pENTR223-EXT1人源基因质粒 |
| pENTR223-CARS人源基因质粒 |
| pENTR223-STAT1人源基因质粒 |
| pENTR223-TMEM108人源基因质粒 |
| pENTR223-WDR1人源基因质粒 |
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文献和实验NaCl，充分混合，用微量离心机于4℃以12000g离心5分钟，以回收质粒DNA。 6)吸出上清，用400μl TE(pH8.0)溶解质粒DNA沉淀。用酚、酚:氯仿、氯仿各抽1次。 7)将水相转到另一微量离心管中，加100μl 10mol/L乙醇铵，充分混匀，加2倍体积(约1ml)乙醇，于室温放置10分钟，于4℃以12 000g离心5分钟，以回收沉淀的质粒DNA。 8)吸去上清，加200μl处于4℃以12 000g离心2分钟。 9)吸去上清，敞开管口，将管置于实验桌上直到最后可见的痕量乙醇蒸发殆尽
酶活性；2. 10×CIP 缓冲液和 1U CIP，混合后，37 ℃ 孵育 30～60 min，然后 75 ℃ 加热 15 min 灭活 CIP 活性；3. 琼脂糖凝胶电泳分离并纯化目的 DNA 片段用于连接反应。（二）连接反应【实验试剂与器材】1. T4 DNA 连接酶2. 10×T4 连接酶缓冲液【实验方法与步骤】反应体系：质粒 DNA (0.5(g/? 滋 l) 2? 滋 lDNA 插入片段 (300ng/? 滋 l) 5? 滋 l10× 连接缓冲液 1? 滋 lT4 DNA 连接酶 1? 滋 l加水
宿主菌的感受态细胞。 （四）诱导表达 1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB（含Amp50μg/ml）中37℃过夜培养。 2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中，37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0（最好0.6，大约需3hr）。 3、取部分液体作为未诱导的对照组，余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。 4、分别取菌体1ml，离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1
