LwaCas13a Nuclease

目录号：E381-01A

 

产品描述:

Cas13a核酸酶（又名C2c2）是VI型CRISPR-Cas系统效应蛋白，具有RNA介导的RNA内切酶活性。在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异性地切割靶标RNA。此外，Cas13a还具有依赖于靶标单链RNA的反式切割活性（即旁路切割活性），可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。

本公司开发的Cas13a Nuclease源自Leptotrichia wadei(Lwa) 细菌，采用大肠杆菌重组表达，纯度超过95%，既可以用于体外RNA切割，体外RNA检测，也可用于活细胞RNA的调控、RNA基因的编辑，同时也可以用于光学探针生物学标记。Cas13a在体外与crRNA稳定结合，将Cas13a/crRNA（或者crRNA质粒）转入细胞，实现细胞内RNA的编辑，Cas13a/crRNA也可以被靶RNA激活，从而实现体外高灵敏度的RNA检测。

 

使用建议：

1) 建议全程在冰上配制体系。

2) 为了保证反应的正常进行，需使用高质量的RNA模板。

3) 使用RNase Free的耗材（离心管、枪头等）。

 

产品说明：

1) 蛋白分子量为140kDa

140ng/μl = 1pmol/μl

2) crRNA设计

可以根据如下说明设计LwaCas13a Nuclease 的crRNA。其序列为5’-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAAC-NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3’

其中，5’-Direct Repeat region (长度36nt，直接重复区，红色字体) + Spacer region(长度25-35nt，靶标结合区，灰色区域)-3’。

注：Cas13a切割靶标ssRNA需要特定5’-A/U/C-3’的PFS（protospacer flanking sequence）。

 

保存温度：

-70℃保存。

 

产品包装 ：

 

保存体系：

500mM NaCl，20mM sodium acetate，0.1mM EDTA，1mM TCEP，50% (v/v) Glycerol，pH6.0，at 25℃。

 

质量保证：

经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达95%；内毒素含量< 100EU/mg；qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留；无RNase、核酸内、外切酶污染。

 

切割体系（20μl）：

 

在冰水浴上混合以下体系：

 

37 ℃每30-60s收集一次荧光，80-99cycles。

 

          For research use only.