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蛋白一级结构覆盖率
方法:质谱法
原理:采用质谱技术通过对样品与其理论序列进行匹配得到覆盖率。
仪器:Thermo LTQ-Velos
ABI 4800 MALDI-TOF-TOF
样品要求:样品量:蛋白总量>50pmol,纯度>90%
含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM挥发性无机盐<20mM;不挥发性无机盐<5mM
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文献和实验域 / 折叠花样的总数是有限的。蛋白结构的模块化本质允许一级序列存在插入或删除。一般来说,结构域与功能一一对应(如 Kinase),但并不总是如此(如 TIM 桶),类似的结构可具有不同的功能 , 不同的结构可具有相似的功能。蛋白质结构与功能研究的技术路线如下:对整个技术路线,我们挑选其中的几个来讲一讲。首先就是蛋白结晶片段的选取,前面讲过,一般来说,蛋白质结构域与功能一一对应。因此,为了降低整个项目的难度(多个结构域会增加蛋白制备难度和结晶难度),通常会按照结构域选取蛋白质片段进行重组蛋白制备及结晶
Nature:陈玲玲团队发现核仁新结构调控核糖体 RNA 末端加工重要机制
系内对 200 个核仁候选蛋白质进行了高分辨率的活细胞成像,并筛选到 140 个定位在细胞核仁不同亚结构区域的蛋白质。对这 140 个核仁蛋白质的深入研究发现,12 个蛋白质定位于 DFC 外部,形成厚度约为 200 nm 的球壳状新结构,被命名为 PDFC。研究人员进一步利用光学超分辨显微成像系统性地完善了核仁的精细亚结构分析,为更好地认识核仁组织结构和工作机制提供了重要基础。 高分辨率活细胞筛选发现核仁全新特征区域-PDFC 研究团队发现 PDFC 关键蛋白质 URB1 具有分子量大,流动性慢的特征
颜宁团队 2021 首秀+ 2020 年度文章赏析,看大牛如何玩转结构生物学!
在 PNAS 发表题为 Cryo-EM analysis of a membrane protein embedded in the liposome 的研究成果。本篇文章通过对蛋白质脂质体制备条件优化,石墨烯载网筛选及深度 2D 分类, 设计了一个利用冷冻电镜技术对于嵌入脂质体中高分辨膜蛋白结构分析的完整工作流程,为膜蛋白结构和功能的研究提供了思路。本篇文章设计了一个利用冷冻电镜技术对于嵌入脂质体中高分辨膜蛋白结构分析的完整工作流程。该流程包含:蛋白质脂质体准备过程的优化(样品制备过程中的去垢剂,脂质
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