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文献和实验( 1 ) 有丝分裂中期截获剂,任选以下几种之一: ( a ) 冰水(尤其适用于温带植物幼苗):淡水或瓶装水装满一个 5~15 ml 的试管的 2/3 ( 见注 1 );剧烈摇晃至出现气泡,置于 -20°C 直至水开始结冰,再振荡,然后保存于冰箱。 ( b ) 8-羟基喹啉(适用于许多物种):制备浓度为 2 mmol/L 的水溶液(淡黄色,需 12 h 溶解);可 4℃ 黑暗保存 6 个月。 ( c ) 秋水仙素(适用于多数植物):制备 0.05%~1% (m/V) 的水溶液。可 4℃
、操作步骤 1、取一eppendorf管加入提纯TMV(10mg/ml)400ml,再加入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12000g离心10分钟。 2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止。 3、吸取水相于新eppendorf心管,加入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12000g离心10分钟。 4、取水相,加入1/10倍体积的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍体积的冰冷乙醇,混匀
仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE缓冲液,无RNA酶的双菌水。 四、操作步骤 1、取一eppendorf管加入提纯TMV(10mg/ml)400ml,再加入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12000g离心10分钟。 2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止。 3、吸取水相于新eppendorf心管,加入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12000g离心10分钟。
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