PM脉冲缓冲液(电诱导细胞融合)

电穿孔和电融合技术

在制取杂交瘤细胞制备单克隆抗体方面用处很大。几个实验室已证明使用电场电融合效率比常规的化学融合方法高10到100倍，最近，贴壁细胞的电融合还被用来研究细胞融合时细胞的骨架成分和细胞器的动力学重排。【仪器、材料和试剂】1、仪器：脉冲发生器；样品池（一个盛细胞的容器和两个平行的金属电极）；CO2培养箱，显微镜；离心机，微量移液器，镊子，剪刀，手术刀片，三角瓶，吸管，毛细管，离心管，载玻片，盖玻片，NALGEN一次性滤器.2、材料：外源DNA，对数生长中期细胞3、试剂： 穿孔介质（PM）：磷酸钾 15

电穿孔与电融合技术

方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比，电穿孔具有很多优点。首先，不必象显微注射那样使用玻璃针，不需要技术培训和昂贵的设备，可以一次对成百万的细胞进行注射。第二，与用化学物质相比，电穿孔几乎没有生物或化学副作用。第三，因为电穿孔是一种物理方法，较少依赖细胞类型，因而应用广泛。实际上，对大多数细胞类型，用电穿孔法基因的转移效率比化学方法高得多。 除了能使细胞膜具有通透性，让外界的分子扩散入胞液中以外，高强度的电场脉冲也能引起细胞融合，这一现象叫做电融合

原生质体融合技术（仙台病毒法、聚乙二醇（PEG）法、电融合法）

一、仙台病毒法 仙台病毒诱导细胞融合经四个阶段： ①两种细胞在一起培养，加入病毒，在4℃条件下病毒附着在细胞 膜上。并使两细胞相互凝聚； ②在37℃中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需 要Ca2+和Mg2+，最适PH为8.0一8.2； ②细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP； ④融合成巨大细胞，仍需ATP 。 病毒促使细胞融合的主要步骤如下： 1.两个原生质体或细胞