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深圳子科生物科技有限公司
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10
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E. coli-Enterobacteria Chromogenic Agar
| 货品名称:大肠杆菌肠杆菌显色琼脂(EEC) English name:E. coli-Enterobacteria Chromogenic Agar 货号:2018 规格:30.5g/L 应用领域:食品 应用:用于区分食品中的大肠杆菌和其他肠杆菌。 品牌:西班牙Condalab 西班牙Condalab 成立于 1960 年,是西班牙第一家为微生物学和分子生物学制造的脱水培养基,也是世界领先的培养基之一,成立于西班牙的首都—马德里。Condalab 因提供基础琼脂粉、蛋白胨、酵母粉和琼脂糖等原料而闻名,出口全球 120 多个国家。 |
组分 g/L:琼脂14g/L; 营养素16g/L; 显色混合物0.5g/L
PH值:7.1±0.2
操作步骤:
1、取瓶内干粉30.5g,溶于1000ml去离子水的洁净三角瓶中。
2、缓慢加热,不停搅拌,使其完全溶解。避免过热,切勿高压灭菌。
3、加热后的培养基冷却至45-50ºC,轻轻地摇动均匀,倾注平皿,使其凝固,晾干备用。
保存:该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内储存2周(2-8ºC,避光)。
接种:划线或涂布接种(冰箱内保存的平板使用前应恢复至室温)。
培养:(35±2 ºC/18-24 h, 48-72h菌落最佳)
结果:
| 微生物(Microorganisms) | 生长情况 | 菌落颜色 |
| 大肠杆菌 ATCC®25922 | 生长良好 | 深蓝-绿蓝 |
| 大肠杆菌 ATCC®8739 | 生长良好 | 深蓝-绿蓝 |
| 沙门氏菌 | 生长良好 | 粉红色 |
| 志贺氏菌 | 生长良好 | 粉红色 |
| 其他微生物 | 抑制、无色 |
性能及局限:有些志贺氏菌菌株含有与大肠杆菌相同的酶,可以长出浅蓝色菌落。大肠杆菌O157:H7不含产生蓝色菌落的酶,会长出洋红色。
贮存条件:干粉需保存于15-25ºC,在有效期前使用。
污染处理:使用过的培养基需要在121ºC灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。
附:供体外诊断使用,产品需专业人员操作。
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文献和实验1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带,这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋,线性,开环等多种不同的形态,所以在电泳时常看到三条不同大小的条带,而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态,可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态;右图为质粒电泳图 2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关,比如: ①在加入裂解缓冲液后,剧烈震荡导致大肠杆菌基因
态细胞的制备方法和转化实验的基本操作。【实验原理】将重组质粒转入大肠杆菌的过程称为转化。转化所用的大肠杆菌需要用物理或化学方法特殊处理,使重组 DNA 分子容易进入细胞内,被处理后易于接纳 DNA 分子的细胞称作感受态细胞。下面介绍感受态细胞的制备。【实验试剂与器材】大肠杆菌菌株,LB 培养基,100 mM CaCl2 ,DMSO 或 2-巯基乙醇,离心机,振荡器,冰浴【实验方法与步骤】(一)感受态细胞的制备1. 将大肠杆菌菌株在 LB 琼脂培养基上画线,37 ℃ 培养 12~16 h;2. 次日从琼脂平板上取
bp 片段,以 pBS 菌液为模板扩增 1500 bp 片段。 模板:菌液 OD600=0.8 时 2 μL /50 μL PCR 扩增程序:同上 a 扩增程序同。 结果:Bioteke 2×power Taq PCR MasterMix 试剂对于质粒或菌液均可高效率的扩增。取扩增产物 10 μL 用 1% 琼脂糖凝胶电泳进行分析可见明亮条带。 二、genomic DNA扩增 1.大肠杆菌DNA扩增 模板:大肠杆菌DNA 50 ng/50 μL PCR扩增程序: 循环数 Step 温度
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