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- 2026年02月11日
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- 保存条件：
-20℃，避光，有效期1年
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- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- 规格：
1盒
Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒说明书
SW2010 Western blotting (小鼠IgG) ECL化学发光法显色试剂盒
SW2020 Western blotting (兔IgG) ECL化学发光法显色试剂盒
SW2030 Western blotting (山羊IgG) ECL化学发光法显色试剂盒
SW2040 Western blotting(小鼠/兔IgG) ECL化学发光法显色试剂盒
SW2050 Western blotting(人IgG) ECL化学发光法显色试剂盒
产品内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制600ml)。
2. 10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP标记二抗，0.1ml，效价1：5000-10000。
4. ECL显色液，25ml A+25ml B。
保存：
-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2-8℃以方便使用。
产品简介：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
操作步骤：(仅供参考)
常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6) 用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入1-2 ul HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8) 根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1-5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
相关产品：
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SW3020 膜再生液
PE0010 ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)
XYF 显影粉
DYF 定影粉
AH 暗盒
JPKD-5*7 胶片
相关文献:
[1] Xu Liu,Xiao-Zhong Guo,Hong-Yu Li,et al. KAI1 reverses the epithelial-mesenchymal transition in human pancreatic cancer cells. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. March 2019. (IF 1.576)
注：更多使用本产品的文献请参考索莱宝官网。
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文献和实验化学发光法 ECL Kit Amersham 飞克级 化学发光法
：分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进，由于这种方法采用放射性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量
而现在最常用的是化学发光法：HRP化学发光底物 Luminol（ECL法chemiluminescence）及其改良法， 13. 常见问题分析与解决方案 13.2其他常见问题分析 无信号 一抗和二抗不匹配 二抗需和一抗宿主的物种相同（如一抗来自兔，二抗为抗兔抗体）。 没有足够的一抗或二抗结合目标蛋白 使用高浓度抗体。4°C延长孵育时间（如过夜）。 封闭剂与一抗
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