- ￥5306
- 博尔森生物
- BES2130PCR
- 中国/上海
- 2025年12月25日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
96T 非一管式
病菌检测系列可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于致泻大肠埃希氏菌的检测。检出限为 10³ CFU/ml。
产品组成（96 测试）
所需仪器
ABI ，BioRad，TaKaRa 等 PCR 扩增仪，电泳仪，凝胶成像仪等电泳配套设备。（使用荧光定量 PCR 仪进行定
性判读时则无需电泳设备）
自备耗材和仪器
①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②冰盒；③移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；④
离心机；⑤涡旋混匀器；⑥金属浴。
样品处理
参照《GB4789.6—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》中的操作步骤进行前
增菌。建议使用试剂配套细菌基因组 DNA 提取系列产品。
实验操作
1．添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）
取所待检样品数+3 的 12 联反应管，将试剂完全解冻，分离心 30s。离心后揭开封口膜，使用穿刺加样法穿过
固封层向每管反应液中分别加入 2μL 模板（或直接使用无菌吸头挑取少许待检菌落至反应管中）。
加样示例：（有 2 个待测样品）
取 5 排 12 联反应管，按顺序第一排全部加 NG-DW，第二排全部加 NG-Ecoli，第三排全部加样品 1，第四排全
请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月
部加样品 2，第五排全部加 PG-Ecoli。
盖好配套的 PCR 管盖后，涡旋混匀 30s，离心 1min，立即进行 PCR 扩增反应。
2. 扩增反应（扩增及产物分析区）
按下列条件设置扩增反应：（如需使用荧光法进行检测请选择 FAM 通道）
3. 产物电泳（扩增及产物分析区）
称量 4. 0g 琼脂糖粉，加入至 200 mL 的 1×TAE 电泳缓冲液中，充分混匀。使用微波炉反复加热至沸腾，直到
琼脂糖粉完全融化形成清亮透明的溶液。待琼脂糖溶液冷却至 60℃左右时，加入溴化乙锭( EB )至终浓度为 0.5μg/mL，充分混匀后，轻轻倒入已放置好梳子的模具中，凝胶长度要大于 10cm，厚度宜为 3mm~5mm。检查梳齿下或梳齿间有无气泡，用一次性吸头小心排掉琼脂糖凝胶中的气泡。当琼脂糖凝胶完全凝结硬化后,轻轻拔出梳子，小心将胶块和胶床放入电泳槽中，样品孔放置在阴极端。向电泳槽中加入 1×TAE 电泳缓冲液，液面高于胶面 1mm~2mm。将5μL PCR 产物与 1μL 6×上样缓冲液混匀后，用微量移液器吸取混合液垂直伸入液面下胶孔，小心上样于孔中；阳性对照的 PCR 反应产物加入到最后一个泳道;第一个泳道中加入 2 μ L 分子量 Marker 。接通电泳仪电源，根据公式：电压=电泳槽正负极间的距离（cm）×5V/cm 计算并设定电泳仪电压数值；启动电压开关，电泳开始以正负极铂金丝出现气泡为准。电泳 30min~45min 后，切断电源。取出凝胶放入凝胶成像仪中观察结果，拍照并记录数据。
可使用 Gold view、Gal-Rad 等等效的核酸荧光染料替代 EB。
推荐使用 DNA Marker：DL2000 或 100bp ladder，等可指示 100bp~1500bp 条带的 Marker。
结果分析
1. 阴阳性判读：进行电泳检测时，需对比 Marker 进行判断，当目的靶标对应位置出现单一显著条带时可判断该靶标为阳性；否则为该靶标检测为阴性。（使用荧光定量 PCR 仪检测时，检测孔 Ct≤30 时判断该孔为阳性；当检测孔 Ct＞30 时，该检测孔为阴性）
示例电泳图
2. 有效性判读：
需同时满足：1.空白对照中所有泳道均为阴性；2.阴性对照中 uidA 泳道阳性，其余泳道阴性；2.阳性对照中所有泳道阳性，此时可判断实验有效。如无法满足上述条件，则实验无效，需重复实验；如重复后结果仍为无效，请于本公司技术支持联系。
3. 结果判读：
在实验有效的情况下，可根据下表进行判读：
97%以上大肠埃希氏菌为 uidA 阳性，可参考阴性对照中该基因检测结果判断扩增效果；
当结果判定为 EPEC 阳性时，若 bfpB 靶标为阳性则说明样品含有典型 EPEC；若 bfpB 靶标为阴性则说明样品为非典型 EPEC；
当结果判定为 STEC/EHEC 阳性时，若 eae 靶标为阳性则说明样品含有典型 EHEC；若 eae 靶标为阴性则说明样品为非典型 EHEC。
注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，使用移液器，试验产生的所有废弃物及时处理。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30
秒。
5．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验。 过氧化氢酶试验：滴加3% 过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。本菌为阴性反应。 3、需购买试剂： 菌株 培养基及试剂 金黄色葡萄球菌 HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117 兔血浆、HB0109-7营养琼脂培养基 大肠埃希氏菌 HBIG13 HBI大肠杆菌生化鉴定条、HB8280
因子（TPO）在巨核细胞生成过程中的作用以及血小板生成因子在特发性血小板减少性紫瘢（ITP）、再生障碍性贫血（AA）和特发性血小板多症（ET）等疾病过程中的病理生理意义，日本Hirayama等[9]用TaqMan EZ RT-PCR试剂盒在ABI7700反应系统测定了正常人和ITP、AA、ET病人的骨髓基质细胞TPO mRNA水平，又用ELISA方法测定了骨髓和末梢血的TPO浓度。结果显示ITP和AA病人TPO mRNA水平明显升高，而ET病人的TPO mRNA水平则正常，经类固醇治疗后ITP病人TPO
的多数菌株无动力，生化反应和抗原结构均近似痢疾杆菌，应予注意。EIEC可引起豚鼠角结合膜炎，临床上可藉此协助鉴定EIEC。 （4）肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）:引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。EHCO的主要菌型是O157：H7，还可有O26、OⅢ等。 表9-2 引起急性腹泻的大肠杆菌 肠产毒性大肠杆菌
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