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北京永欣康泰科技发展有限公司
双侧颈总结扎,四血管阻断
2、模型的选择
目前常用于研究血管性痴呆的动物模型主要有四血管阻断(4-VO)和双侧颈总动脉结扎(2-VO)模型。
脑基底动脉环(Willis环)示意图:
就是永久性结扎双侧颈总动脉,2-VO法制作的血性痴呆模型实质上是以慢性低灌注引起脑缺血缺氧,最终导致神经细胞功能下降、学习记忆功能障碍,较好地模拟了人类因动脉粥样硬化、动脉管腔狭窄等因素导致的血管性痴呆。
以永久性结扎双侧颈总动脉导致痴呆的老年大鼠,在结扎术后2个月学习记忆能力仍无恢复趋势,这将有利于药物疗效的动态观察。可以作为血管性痴呆模型用于基础实验研究。
就是用电凝针插入双侧翼小孔烧灼双侧椎动脉,造成永久性闭塞。然后用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉5min,共夹闭3次,每次间隔1h。
4-VO为目前国际公认的VD造模方法,它可高度模拟VD的发病特点,且缺血后生理指标 稳定,不影响缺血后结果,病理改变较为充分、 明确,中分指数低,无明显肢体运动障碍,但存活率相对较低。
在研究药物治疗效果时,我们经常使用的是永久性结扎双侧颈总动脉法,此方法成活率较高,有利于以药物疗效的动态观察,术后还可以通过水迷宫、Y迷宫等一系列的行为学检测来判定药物疗效。
所有动物术前禁食不禁水12h。
手术器械打包后,高压消毒。
动物麻醉:诱导麻醉采用3%异氟烷,气体流量1000cc/min;维持麻醉2%异氟烷,气体流量1000cc/min。
手术过程:动物麻醉后,使用电推剪剃掉术区(腹侧颈部)被毛,碘伏、酒精依次消毒皮肤。沿颈部中线做纵行切口,钝性分离皮下组织、肌肉,分离双侧颈总动脉,在颈总动脉处用6-0丝线永久结扎。逐层关闭创口并缝合,碘伏消毒。
行为学检测:水迷宫、Y迷宫、旷场、新物体识别、平衡木等
水迷宫:
在潜伏期测定中模型组明显会比假手术组消耗更长的时间,而经过学习后,将平台撤走,假手术组在游泳过程中目的性较强,穿越原有平台位置次数对比模型组明显较多,模型组呈现无定向轨迹性运动。
病理染色:HE染色、尼氏染色、神经髓鞘固蓝染色(LFB)
神经髓鞘固蓝染色(LFB):
此法可将神经元胞体染成红色,具有神经纤维的髓鞘染成蓝色,模型组与假手术组相比细胞蓝色部分较少,髓鞘脱失严重,具有明显差异。
免疫组化:MBP、Ibal、GFAP
MBP(髓鞘碱性蛋白):是构成髓鞘的主要蛋白成分,模型组对MBP的表达会成明显下降趋势,髓鞘脱失严重。与假手术对比有显著性差异。
Ibal:可以特异性表达出静息状态和激活状态的小胶质细胞,小胶质细胞静息状态时一般为分枝状,当受到炎症因素等刺激时可迅速激活,表现出包体变大,突起回缩等特征。假手术组的小胶质细胞多数维持在静息状态,仅有少数激活;而模型组大多数小胶质细胞胞体变大、突触回缩,为激活形态,这表明长期的低灌注不足引起小胶质细胞增生活化。
GFAP:是星形胶质细胞中的特有蛋白,手术后模型组星形胶质细胞增生较多,星形胶质细胞胞体粗大,从胞体发出许多长分支,与假手术组相比具有显著性差异。
ELISA检测:SOD、MDA
SOD:手术后模型组SOD的含量明显增高,活性增强,与假手术相比具有明显差异性。
MDA:假手术组浓度一直维持在较低水准,手术后模型组MDA浓度大幅度上升,与假手术相比具有明显差异性。
综上双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO)法复制的血管性痴呆病(Vascular dementia,VaD)大鼠模型与临床上血管性痴呆病(Vascular dementia,VaD)的病理生理过程很相似,是目前最常用的复制血管性痴呆病(Vascular dementia,VaD)模型的方法,也是研究血管性痴呆白质损伤机制可靠有效的模型,且具有一定的经济实用性。
构建动物模型名称 | 适用范围 |
1、裸鼠肿瘤(皮下、原位)动物实验 | 胰腺、肝、胃原位接种、皮下接种 |
2、兔 腹主动脉、颈动脉硬化(球囊法)模型 | 稳定制备 颈动脉、腹主动脉硬化模型 |
3、心肌缺血、大、小鼠、兔、小型猪心电图、心脏超声、病理评价 | 心肌缺血及再灌注、心梗、血压测定(麻醉及清醒状态下)等 |
4、Ⅰ、Ⅱ型糖尿病大小鼠、兔动物模型 | 高脂诱导+STZ制备糖尿病模型及糖尿病并发症研究,药效评价 |
5、骨质疏松大鼠、小鼠实验(去势) | 老年性骨质疏松相关疾病临床前药效评价 |
6、股骨头坏死、骨缺损、鼠、兔模型 | 镇静、镇痛动物模型,行为学模型制作及药物筛选 |
7、Apoe小鼠动脉粥样硬化整体实验 | 高脂饲养、取材、病理实验、大体染色等 |
8、急性粒细胞白血病动物实验 | |
9、肾结石快速成模大鼠模型 | 乙二醇致大鼠肾脏草酸钙结石模型 |
10、眼科大小鼠模型、视网膜铺片、 玻璃体腔内注射 |
眼科疾病模型及相关检测方法 |
11、脑缺血、帕金森、脑出血动物模型 | 脑病实验、颅内注射、技术成熟稳定 |
12、肾脏缺血、肾移植、肾衰动物模型 | 肾脏缺血、肾移植、肾衰竭实验及检测平台 |
服务项目 | 服务承诺 | 服务周期 | 样本种类 |
病理切片、免疫组化 | 染色结果照片 | 2-3周 | 组织 |
Western blotting | 胶片 | 1-2周 | 蛋白样本或组织 |
流式细胞服务 | 散点图、分析数据、设备信息等 | 1-2周 | 血样、骨髓等 |
细胞凋亡检测 | 凋亡图、数据分析 | 细胞 | |
RT-PCR | 扩增图 | 1-2周 | RNA或组织 |
血压监测(无创式) | 实时血压数据 | 大、小鼠 |
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