Nitric Oxide Assay Kit/NO检测试剂盒

NO检测试剂盒（Nitric Oxide Assay Kit） E1030

(Nitric oxide，NO)是一种重要的气体信号分子和效应分子，可以作为第二信使参与许多生物效应和生理病理过程。体内NO含量低，半衰期短，且易被氧化。Griess反应一直是最经典的生物样品NO测定方法，反应产物的光密度OD值与NO浓度呈线性关系。本试剂盒基于Griess 反应原理，采用优化的反应条件和比色法测量液体样品NO的浓度。方法简单，线性范围2.5~800µM。按照每150 µl反应体系含50 µl样品推算，相当于样品的检测灵敏度约为300 pmol/50 µl。

描述：

特点：

1、    试剂盒基于最经典的Griess反应原理。操作方法简单方便，灵敏度高。

2、    线性范围2.5-800uM。

3、    适用于血液、尿、培养基中的检测。

4、    发表的SCI文章超过50篇

规格：500次

储存：4ºC避光保存6个月有效

准备步骤：

测定前取出试剂升温到室温。

标准品稀释：每次测量均新做标准曲线，用与样品相似的液体稀释标准品。

A.    取100 mmol/L NaNO2标准品8µl，加到992µl蒸馏水中，得到1000µl之800 µM管。

B.    从800 µM管取200µl加入200µl蒸馏水得400µM管，然后依次取样用蒸馏水倍比稀释，得到200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57 μM管。最后设置不加标准品的0浓度管。

C.    从以上各管各取50 µl 加入酶标板。

D.    等待后续加入样品，以及加入Griess试剂后，一起反应并测量。

样品测量：

1.         取50 µl标准品或样品，加入96孔板中。

2.         每孔加入50 µl Griess R1

优化步骤：室温避光放置5分钟。此步骤可进一步提高灵敏度。但NO浓度较高时可省略。

3.         每孔加入50 µl Griess R2。

4.         室温避光放置5分钟。

5.         540 nm (490-550 nm均可)测定吸光度。应在30 min内测完，以免退色降低灵敏度。

6.         制备标准曲线：以吸光度OD值为x轴，标准品浓度为y轴，用Excel做图并得到标准曲线公式。

7.         将样品OD值代入公式计算NO浓度。

说明：

1.         在30 min内测完，以免退色而降低灵敏度。

2.         快速测定：如果样品NO浓度较高，则可将Griess R1和R2预先1:1等体积混合后，各取100 µl混合试剂与50 µl样品反应测定。

3.         样品所赖以存在的液体的内在成分会干扰测定，降低OD值和灵敏度。干扰程度：尿液>血清>血浆>培养基>蒸馏水。

4.         每次测量必须新做标准曲线，尽量用与样品相同的液体稀释标准品。

5.         细胞培养基中酚红的红色颜色不影响测定。

 

以下为使用普利莱NO检测试剂盒发表的文章，供参考：

1、Ji Y, Sun X, Liu X Y, et al. Toxoplasma gondii: effects of exogenous nitric oxide on egress of tachyzoites from infected macrophages[J]. Experimental parasitology, 2013, 133(1): 70-74.

2、Hong Q, Qi K, Feng Z, et al. Hyperuricemia induces endothelial dysfunction via mitochondrial Na+/Ca 2+ exchanger-mediated mitochondrial calcium overload[J]. Cell calcium, 2012, 51(5): 402-410.

3、Ding Y, Zhang Z F, Dai X Q, et al. Myricetin protects against cytokine-induced cell death in RIN-m5f β cells[J]. Journal of medicinal food, 2012, 15(8): 733-740.