PBMC 分离服务丨人外周血单个核细胞 | TDCC实验推荐

【TDCC介绍】

      TDCC实验是一种用于评估免疫系统（尤其是T细胞）对肿瘤细胞杀伤能力的体外或体内实验模型。该实验通过将肿瘤细胞与免疫效应细胞（如T细胞、NK细胞或PBMCs）共培养，直接观察免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效果，广泛应用于肿瘤免疫治疗研究（如CAR-T、PD-1/PD-L1抑制剂、肿瘤疫苗等）。

实验原理

      效应免疫细胞（如细胞毒性T细胞、NK细胞）通过识别肿瘤细胞表面的抗原（如MHC-抗原肽复合物或应激配体），释放穿孔素、颗粒酶或激活死亡受体通路（如Fas/FasL），诱导肿瘤细胞凋亡或裂解。可通过检测肿瘤细胞存活率或免疫细胞活化标志物（如IFN-γ分泌）来量化杀伤效果。

实验步骤

1. 肿瘤细胞准备：肿瘤细胞用CFSE（5 μM）或Calcein-AM（1 μg/mL）标记，37℃孵育15-30分钟。PBS洗涤3次，调整浓度至1-5×10⁴/mL，接种至96孔板（100 μL/孔）。

2. 免疫细胞准备：分离PBMC或纯化T/NK细胞，调整浓度至效应细胞:靶细胞（E:T）比例（通常10:1至1:1）。

3. 共培养体系：

实验组：肿瘤细胞 + 免疫效应细胞（如CAR-T）。

对照组：肿瘤细胞单独培养（自发死亡对照）。

              肿瘤细胞 + 未激活T细胞（阴性对照）。

              肿瘤细胞 + 抗CD3/CD28激活的T细胞（阳性对照）。

培养条件：37℃、5% CO₂培养12-48小时（根据肿瘤细胞敏感性调整）。

4. 杀伤效果检测：

方法1：LDH释放法（细胞裂解）

• 收集上清，加入LDH检测试剂，避光反应30分钟。
• 酶标仪测490 nm吸光度（参考波长630 nm）。
• 计算杀伤率

方法2：流式细胞术（凋亡/坏死）

• 收集共培养细胞，Annexin V-FITC/PI双染。
• 流式检测肿瘤细胞（CFSE+）中Annexin V+/PI+比例。

应用

1. CAR-T/NK细胞疗法：评估工程化免疫细胞对特定肿瘤的杀伤效力。
2. 免疫检查点抑制剂：研究PD-1抗体等药物对T细胞功能的恢复作用。
3. 肿瘤微环境研究：加入MDSCs或Tregs，模拟免疫抑制环境。

      通过TDCC实验，可高效筛选具有抗肿瘤潜力的免疫细胞或药物，为肿瘤免疫治疗研究提供关键数据。若需更接近体内的结果，可结合人源化小鼠模型（如PBMC-NSG或CDX/PDX模型）。