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文献和实验较简单;但容易产生杂质如成纤维细胞等,成纤维细胞生长快,故培养之细胞质量较差;培养的大多数细胞无收缩性;且原代细胞的获得需3~4周,获得大量平滑肌细胞耗时长(17)。既往酶消化法较组织块法复杂、精细;适宜的酶浓度和培养时间的确定较为困难;然而在较短时间内可获得大量的平滑肌细胞,1996年有学者报道(Chambers(18)等)酶消化法纯度为70%。可见一种快速、高效、高纯度的酶消化法培养膀胱平滑肌的方法显得尤为重要。 本实验研究两只兔所有标本均获成功。倒置显微镜观察平滑肌细胞24小时均可见膀胱平滑
,有可能会与某些实验设置之间存在冲突。在这种情况下,我们推荐使用不含 VEGF 的内皮细胞生长培养基。该培养基专门针对人类原代细胞进行优化,但也可用于牛、猪、小鼠、兔、象、狗和大鼠的大血管内皮细胞以及各种内皮细胞系。● 细胞分离试剂盒romoCell 细胞分离试剂盒的开发是为了用于温和和有效地分离培养中附着的人类原代细胞。每一产品批次均使用人类原代细胞进行检测。该试剂盒包括以下三种成分:1. HepesBSS (30 mM Hepes)2. 胰蛋白酶/EDTA溶液(0.04 % / 0.03
培养液:MEM(GIBCO),20%FBS,双抗100IU/ml; 原代细胞培养:取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头,于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中,用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。 传代: (1)吸除培养瓶内旧培养液。 (2)D-Hanks液冲洗2遍。 (3)加入消化液少许,以能覆盖瓶底为限。 (4)倒置显微镜观察发现细胞胞质回缩、细胞间隙增大时,立即终止消化。 (5)吸除消化液,向瓶底注入D-Hanks液
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