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- YLK-E0703
- 国产
- 2025年09月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 样本：
血清、血浆、组织液等液体样本
- 标记物：
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种：
人
- 应用：
科研
- 检测方法：
酶联免疫法
- 检测范围：
详询
- 规格：
96T/48T
96T
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中前病毒整合位点1(Pim1)含量。
相关图片（一）：
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中前病毒整合位点1(Pim1)水平。用纯化的前病毒整合位点1(Pim1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入前病毒整合位点1(Pim1)，再与HRP标记的前病毒整合位点1(Pim1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的前病毒整合位点1(Pim1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中前病毒整合位点1(Pim1)浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（800ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
相关图片（二）：
操作步骤
- 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 400ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 200ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 100ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 50ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 25ng/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
- 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
- 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
- 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
- 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
- 温育：操作同3。
- 洗涤：操作同5。
- 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
- 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
- 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
相关图片（三）：
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
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文献和实验1、ELISA ：对gp41 HIV 1型抗体的检测 是标准的筛选方法，敏感性可达99.5%，但特异性并不高。该法的阳性者中仅13%为真正的HIV者，因此，属筛选试验。 2、蛋白印迹（Western印迹)法：是最常用的证实实验。若检出所有3个HIV主要基因gag、po1、env产物的抗体时为阳性，可确诊为HIV感染。 3、HIV1型抗原检测 由于血中p24抗原浓度低且形成了免疫复合物，p24抗原检测阳性率不如抗体阳性率高。在HIVl型感染的无症状
自己测滴度吗? 答：我们是在HT1080细胞株中对纯化的慢病毒进行滴度测定的。常用有4种方法进行慢病毒滴度测定，分别是： (1)通过ELISA对病毒颗粒中的p24蛋白进行检测; (2)通过定量PCR对病毒颗粒的RNA进行检查; (3)通过定量PCR对整合到基因组DNA中的病毒序列进行检测; (4)通过FACS对荧光蛋白的表达水平进行检测。 我们用基因组DNA定量PCR的方法进行慢病毒滴度的检测。前两种方法并不能区分病毒颗粒是否有活性
抗体不能发的应有的作用。在潜伏感染阶段，HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中，不被免疫系统识别，逃避免疫清除。这些都与HIV引起持续感染有关。 三、微生物学诊断 检测HIV感染者体液中病毒抗原和抗体的方法，操作方便，易于普及应用，其中抗体检测尤普通。但HIV P24抗原和病毒基因的测定，在HIV感染检测中的地位和重要性也日益受到重视。 (一)抗体检测 主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA
