土壤亮氨酸氨基肽酶Solid-Leucine Aminope

土壤亮氨酸氨基肽酶Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP试剂盒
分光光度法 
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：                           
S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：
S-LAP分解L-亮氨酰对硝ji苯胺生成对硝ji苯胺，后者在405nm有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。



试剂的组成和配制：
试剂一：液体65mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

S-LAP测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。
2、在试剂二瓶中加入30mL试剂一充分溶解（如较难溶解，可60℃水浴加热约30min促进溶解）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、操作表
试剂名称    对照管    测定管
新鲜土样（g）    0.2    0.2
试剂一（μL）    1200    
试剂二（μL）        1200
混匀， 37℃振荡反应1h后，8000g 4℃离心10min，取1mL上清液于比色皿中，405nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

土壤亮氨酸氨基肽酶Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP试剂盒
S-LAP活力单位的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义：每天每g土样每天生成1 μmol 对硝ji苯胺定义为一个酶活力单位。
S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V反总÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA
V反总：反应体系总体积，1.2×10-3 L；ε：对硝ji苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.2g。