iFluor 405酪胺

iFluor 405酪胺优势

1.荧光信号强度比tyramide（TSA）试剂高10-50倍

2.与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号

3.Styramide 偶联物可以明显减少一抗的消耗

 

iFluor 405酪胺适用范围：

该产品适合标记抗体或蛋白。应用于细胞或组织。

 

iFluor 405酪胺实验图

iFluor 405酪胺产品简介：

iFluor  405 酪胺（iFluor 405 Styramide），是一种用于荧光信号放大的产品，它通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 405 Styramide。

 

注意事项：

1. 该产品不能进行活体成像。

2. 100slides：一管试剂足够100个玻片使用。

 

 

iFluor 405酪胺适用仪器

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荧光显微镜
激发：	DAPI/Violet 滤波片组
发射：	DAPI/Violet 滤波片组
推荐孔板：	黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入HRP标记的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波片观察Styramide的荧光信号。