iFluor 430 酪胺

iFluor 430 酪胺优势

1.酪胺信号放大技术（TSA）是一种通用和强大的酶放大技术，提高了检测灵敏度

2.在免疫组化应用中，TSA法的敏感性增强使原代抗体稀释度增加，以减少非特异性背景信号，并能克服由于固定程序不理想或靶蛋白表达水平低而导致的弱免疫标记

iFluor 430 酪胺实验效果图

iFluor 430 酪胺注意事项

1. 该产品不能进行活体成像。

2. 100slides：一管试剂足够100个玻片使用。

3. 200slides大约为100ug。

iFluor 430 酪胺简介

iFluor 430酪胺含有明亮的iFluor430，是Alexa Fluor®430酪胺、TSA试剂或其他光谱类似的荧光酪胺的替代品。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 430 酪胺。

iFluor 430 酪胺适用仪器

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荧光显微镜
激发：	紫色滤波片组
发射：	紫色滤波片组
推荐孔板：	黑色透明底板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/渗透/阻断细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中加入一抗
3. 添加 HRP 标记的二抗
4. 制备酪胺工作溶液并在室温下涂抹于细胞或组织中 5-10 分钟

 

溶液配制

储备溶液配制

iFluor 430 酪胺储备液 (200X)
向小瓶中加入 100 µL DMSO 并充分混合。
注意：未使用的酪胺原液可以储存在 2-8 °C。

 

工作溶液配制

iFluor 430 酪胺工作溶液 (1X)
将 100 μL 的 Tyramide 储备溶液添加到 20 mL 您选择的含有 0.003% H2O2 的缓冲液中。
注意 Tris 缓冲液，pH=7.4 可用于获得最佳性能。
注意 酪胺工作溶液应立即使用，并在使用当天全新配制。
注意 20 mL 溶液可用于 200 次检测。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

酪胺标记

1.向每个样品中添加100 µL 酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。我们提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波片观察酪胺的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660