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卡梅德生物科技(天津)有限公司
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羊驼单克隆抗体制备服务
采用噬菌体抗体展示技术制备单克隆抗体具有不受物种来源的限制等优势,卡梅德生物能够为客户在较短的周期内生产拥有高特异性和高亲和力的羊驼单克隆抗体。利用该技术制备的杂交瘤以抗体基因的形式保存在噬粒载体上,结合不同的蛋白表达策略,如原核蛋白表达,真核蛋白表达等,可以实现多种规格的单克隆抗体生产,保证交付高品质的重组单抗。此外,我们拥有一站式筛选平台,有配套的抗体人源化和抗体亲和力成熟等抗体工程改造服务,助力抗体药研发与生产。
羊驼单克隆抗体制备:
羊驼抗体只具有重链不含轻链,因此被称为重链抗体(heavy Chain Antibody, hcAb,如图1中D所示,羊驼抗体缺少轻链,由4个HC和2个VH组成,其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体(single domain antibody, sdAb)。独立的羊驼VH区域具有完整的抗原结合能力,同时不像人工改造的单链抗体片段(single chain Fv, scFv),容易聚集。和传统抗体相比,羊驼抗体具有稳定的性质,例如在60℃仍能保持活性,抵抗极端的pH环境。
目前我们成功建立了来自34只羊驼的天然噬菌体抗体展示文库,有效库容量达到1010,通过该文库的筛选,能够缩短羊驼单抗的制备周期。同时,采用不同的筛选策略,如抗原递减法,结合我司的蛋白重组表达平台,能够为客户提供达-5g/L水平的重组抗体抗体表达发酵服务,在很大程度上提高了抗体批间一致性和稳定性。
| 步骤 | 服务内容 | 交付材料 | 周期 |
| 半抗原改造 | / | 改造后的小分子衍生物LC-MS的鉴定结果 | 1-2周 |
| 完全抗原制备 | 卵清蛋白 | 完全抗原SDS-PAGE、UV或MALDI-TOF鉴定结果 | 1-2周 |
| 钥孔蓝蛋白 | |||
| 人血清白蛋白 | |||
| 人-γ球蛋白 | |||
| 噬菌体抗体库的制备 | 抗原乳化,免疫1-2只羊驼2-3次 | PCR结果,免疫检测结果(含ELISA的效价和特异性检测结果),实验记录 | 3-5个月 |
| 收集脾细胞(或者外周血淋巴细胞),可变区基因分离 | |||
| 噬粒构建,转染表达,文库构建 | |||
| 重组抗体表达 | 抗体筛选,构建表达质粒,真核或原核表达重组抗体 | 1-2个月 |
我们的服务优势:
--采用成熟的羊驼免疫程序结合噬菌体展示技术,构建驼源免疫抗体库,筛选得到高亲和力和特异性的单克隆抗体;
--丰富的经验积累,成熟的技术路线,保证产品质量稳定可靠;
--严格的质控体系:标准硬件设施平台,满足cGMP的文件关键管理规则;
--能克服传统方法难以解决的靶点、副作用大等问题,是理想的抗体药制备来源;
--提供单克隆抗体大规模生产服务,满足工业化生产需求;
--完整的上下游服务:提供从抗原制备、噬菌体文库构建羊驼免疫、抗体筛选到抗体人源等一体化服务;
--服务可定制:根据客户需求制备,为每一个客户量身定制实验方案,满足每一位客户的特殊需求
公司介绍:
卡梅德生物科技(天津)有限公司作为国家高新技术企业,专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务,单、多克隆抗体开发,噬菌体文库构建与筛选服务;同时,基于我公司成熟的五大核心技术服务平台,成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
核心平台:
---噬菌体抗体展示技术平台
卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体(M13,T7噬菌体)展示技术平台,能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体(纳米抗体/驼类纳米抗体)制备方案,包括动物免疫,文库建立,文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
---抗体工程技术平台
卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台,多克隆抗体制备服务平台,抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台:基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台,能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体,同时基于噬菌体展示技术,我司能够制备多物种的重组单克隆抗体,包括小鼠,兔子,骆驼,羊驼以及人单抗。
多克隆抗体制备服务平台:能够为客户提供兔多抗,羊多抗,骆驼类多抗,牛多抗等多物种的抗体制备服务,根据不同的抗原类型,来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案,以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。
抗体一级序列测序平台:为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求,我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务;同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。
抗体改造技术平台:卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备,抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体,均成功交付。
---蛋白表达与纯化服务技术平台
卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台,能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。
哺乳动物表达平台: 目前公司拥有Freestyle CHO,Expi CHO,CHO-DG44,HEK293F,Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则,全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂,以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系,相比市面常用蛋白表达载体,能够为客户提供更高纯度的蛋白。
昆虫细胞表达平台:目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9,配套使用的是来自Gibco的培养基,只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台,我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白,包括多种GPCR家族成员蛋白。
原核蛋白表达平台:大肠杆菌(E.coli)重组蛋白表达技术经过多年的发展,已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达,一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备,针对每位客户的需求,我们的都会提供具体的方案设计。
酵母蛋白表达平台:毕赤酵母,酿酒酵母等蛋白表达体系,适用于需要真核表达蛋白,同时兼具产量与性价比的项目需求特点。
植物表达平台:为了提供更好的服务,卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务,项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度,高质量的植物来源的蛋白,已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。
---蛋白批量发酵平台
超高密度发酵技术:卡梅德生物科技能够为客户提供5L,10L,30L,80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务(微载体贴壁培养技术),人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml,适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵,能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台,我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。
同时,借助有氧发酵技术,我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务,采用有氧发酵类型的原核发酵技术,蛋白产量比传统的原核发酵要高(相差接近100倍蛋白产量和得率)。
---蛋白纯化技术平台:
我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪,同时拥有GE全套填料,包括Sphedax 75/200,500, G25,G100,CMFF,Q-FF,DEAE以及不同规格的预装柱等,能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业,硕士博士学历占比98%,因此有能力为客户提供快速,高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。
---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台
稳定细胞系构建平台:卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务,如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默,敲除,过表达等稳定细胞系;同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染(Lipofectin2000/3000)的稳定转染细胞系构建服务,如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。
卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆,蛋白定量,免疫印迹检测(SDS-PAGE、WB),宿主核酸检测,蛋白抗体亲和纯化,ELISA操作,内毒素检测,HPLC分析,免疫组化,IP,免疫浊度,流式细胞术等服务。
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文献和实验1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交瘤细胞既可产生抗体,又可无性繁殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体,由于每种抗原都有几个抗原决定簇,用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体,即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来
1. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。2. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
一、实验目的: 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑,它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理: 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖,但不能分泌特异性抗体;而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体,但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞,继承了两个亲代细胞的特性,既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性,又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养
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