羊驼单B细胞单抗制备服务

       卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于抗体制备研究。我们拥有经验丰富的抗体制备团队，积累了成熟的技术经验，具有齐全的抗体生产设备，能够为客户提供优质的重组单克隆抗体制备服务，包括兔源，鼠源，驼源，羊源，鸡源等。
      单个B细胞抗体制备技术相较于传统的方法具有速度快、高通量、特异性强等优势。利用该技术从筛选获得的单B细胞中直接PCR获取编码抗体的基因，通过测序、表达载体构建、表达鉴定和纯化一站式服务，卡梅德生物能够为客户在较短的周期内生产出拥有高特异性和高亲和力的羊驼单克隆抗体。
羊驼单B细胞单克隆抗体制备：
  羊驼产生两种类型的抗体：(i) 由重链和轻链二聚体组成的常规抗体，以及 (ii) 一类只具有重链不含轻链，被称为重链抗体（heavy Chain Antibody，hcAb）。如图1中D所示，羊驼重链抗体缺少轻链，由4个HC和2个VH组成，其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体（single domain antibody，sdAb）。和传统抗体相比，羊驼抗体具有稳定性高、易于进行基因改造，免疫原性弱，特异性强，亲和力高，在真核或者原核系统中表达量高等众多优点。并因其与人抗体重链氨基酸序列高度相似，更易于进行人源化改造，在当前的抗体药研究领域中应用广泛。
        单B细胞单抗制备技术是近些年来新兴的一种抗体制备技术。卡梅德生物利用此技术，从羊驼外周血或免疫器官中提取淋巴细胞，通过分选技术鉴定和分离出特定的B细胞后将其进行单细胞培养，使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和抗体特异性引物鉴定单B细胞分泌抗体的特异性，通过PCR技术扩增出特异性抗体基因，将其克隆到表达载体中，并在客户指定的系统中进行表达，纯化好的抗体通过ELISA等方法进行表达验证。卡梅德生物利用单B细胞单抗制备技术获得的抗体品质出众，且成功率高。
 



图1 A，传统IgG；B,传统抗体Fab片段；C，传统抗体的单链Fv片段；D，重链抗体或驼类抗体；E，驼类抗体的VH区域或单域抗体（sdAb）
 
制备流程：
 

 
服务内容：
 

步骤	服务内容	交付材料	周期
抗原制备（可选）	半抗原改造/完全抗原制备	改造产物及鉴定结果	具体分析
动物免疫	抗原乳化，免疫羊驼4-5次； ELISA效价测定； 抗血清采集	免疫血清； ELISA检测结果； 实验记录	8-10周
B细胞富集和筛选	PBMC分离； FACS Assay、ELISA Assay；	高通量筛选结果报告， 保证序列多样性的FACS binder； ELISA检测结果报告，阳性克隆株	6-8周
B细胞抗体测序	RT-PCR； 高通量测序	测序原始数据； 特异性序列	1周
抗体表达与纯化（可选）	抗体小规模转染或放大	表达质粒，纯化抗体	具体分析

  
样品要求：
 
 

客户提供	要求
重组蛋白	* ≥3.5 mg，要求蛋白纯度>85%，蛋白要求分子量大于10 kDa，可溶性蛋白浓度在0.5~5mg/mL之间。若要求抗原亲和纯化，需额外提供15 mg左右重组蛋白
多肽与小分子	* 裸肽≥15mg，多肽纯度>90%，不少于10个AA，偶联KLH/BSA/OVA或其他载体蛋白；小分子需要预先对结构进行评估

 
服务优势：
 
--周期短
--不限种属
--可获得抗体序列
--得到的抗体具有更高的特异性和亲和力
--丰富的经验积累
--严格的质控体系
--服务可定制：提供个性化定制服务满足客户的实际需求

公司介绍：
卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

核心平台：

---噬菌体抗体展示技术平台

卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
 

---抗体工程技术平台

卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。

多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。

 

---蛋白表达与纯化服务技术平台

卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。

昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。

原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。

酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

---蛋白批量发酵平台

超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。

---蛋白纯化技术平台：

我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。

 

---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。