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- 卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
- 天津
- 2025年11月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
卡梅德生物科技（天津）有限公司
- 服务名称：
骆驼免疫VHH抗体文库构建服务
卡梅德生物科技（KMD Bioscience）能够为客户提供高质量的，基于M13噬菌体展示的驼源抗体筛选服务，包括双峰驼和单峰驼（羊驼）来源的纳米抗体噬菌体展示技术服务。我们的科学家拥有多年的重链抗体（Vhh抗体）文库展示构建，筛选经验，能够在较短的时间周期内获得高品质的纳米抗体。
驼源抗体文库制备-重链抗体背景
传统意义上血清抗体主要包括IgG1，IgG2，IgG3和IgG4 四种亚型,而驼源主要血清抗体包括IgG1，IgG2和IgG3三种类型，其中IgG1与传统抗体结构相似，含有2条重链和2条轻链；IgG2和IgG3缺少CH1和轻链结构域，因此也被称为重链抗体(heavy Chain Antibody, hcAb)，如图1所示：
驼源抗体文库制备-重链抗体背景
传统意义上血清抗体主要包括IgG1，IgG2，IgG3和IgG4 四种亚型,而驼源主要血清抗体包括IgG1，IgG2和IgG3三种类型，其中IgG1与传统抗体结构相似，含有2条重链和2条轻链；IgG2和IgG3缺少CH1和轻链结构域，因此也被称为重链抗体(heavy Chain Antibody, hcAb)，如图1所示：
重链抗体在羊驼和骆驼血清中的分步是不均衡的，骆驼血清抗体中重链抗体占比约为60-75%，羊驼血清抗体中重链抗体占比约为40-50%。这这种显著的差异导致了构建的骆驼VHH抗体文库具有先天的优势，如表1所示。驼源抗体文库主要是指利用驼源重链抗体的可变区，即VHH区域序列构建的VHH抗体文库，又叫纳米抗体文库。VHH抗体的特点是只含有重链抗体的抗原结合区，如图2所示，氨基酸长度约为110AA，SDS-PAGE显示分子量约为15kDa（远小于传统抗体150kDa的分子量），具有较好的稳定性，能够抵抗低pH环境。 同时在VHH人源化改造方面，也具有良好的适应性，容易满足Car-T等免疫细胞的改造和分选实验要求。
骆驼与羊驼VHH抗体文库对比
驼源抗体文库制备-骆驼VHH抗体库构建服务
卡梅德生物科技(KMD Bioscience)能够为客户提供高质量的、骆驼来源的VHH抗体噬菌体展示文库制备服务。我们坚持采用人用疫苗和生物制药的QbD（Quality by Design）设计原则，在理解和尊重ICH原则的基础上，设计并制备骆驼VHH抗体噬菌体展示文库，为客户提供全程可追溯的产品追溯体系和文件支撑体系。VHH抗体噬菌体展示文库包含抗原设计，动物免疫，文库构建与筛选等主要环节。
---VHH抗体噬菌体展示文库之抗原设计
针对骆驼VHH抗体文库，我们设计了一系列来自于驼源抗体Fc融合表达的人源免疫检查点蛋白。结合我们成熟的Freestyle 293F和Expi CHO细胞悬浮表达平台，我们能够为客户在较短的周期内从基因合成，载体构建到克级蛋白的表达，更多的服务需求，请咨询我们的蛋白表达平台。同时，根据我们的实验结果，我们发现小分子靶蛋白直接与人源Fc片段融合后免疫效果要好于靶蛋白融合羊驼或骆驼Fc片段后免疫结果（具体实验结果，请联系我们的技术人员）。
---VHH抗体噬菌体展示文库之动物免疫
卡梅德生物科技(KMD Bioscience)通过与骆驼和羊驼养殖社建立合作，提供未经免疫的，足龄（28-36月龄）的骆驼或羊驼进行抗原免疫，按照标准免疫方法，免疫4-7针。蛋白抗原按照ELISA血清效价>105标准；小分子抗原免疫ELISA血清效价>104标准。
---VHH抗体噬菌体展示文库之文库构建与筛选
卡梅德生物科技(KMD Bioscience)采用M13噬菌体的pIII蛋白进行VHH抗体(纳米抗体)表面展示。我们的科学家构建了带有Flag和6*His tag双标签的噬菌体载体，同时制备出了具有108转染效率的TG1和XL1-Blue宿主菌感受态，经过2-3次转染与扩增，能够为客户提供有效库容量为108-109,且包装库容为1013-1016/ml颗粒数的高质量VHH抗体展示文库。通过抗原极限施压筛选方式，经过3轮纳米抗体文库淘筛，即可获得多达20-30株具有高亲和力的噬菌体株。通过简单的IPTG诱导，即可在1-2周内获得大量抗体表达产物，以满足客户FACS，细胞活性测试等研究需求。
驼源抗体文库制备---项目流程
注：1.客户提供骆驼外周血淋巴细胞，淋巴结细胞或脾脏细胞（保存在RNA later等溶液中，避免ＲＮＡ降解，蓝冰运输），从第二步开始制备VHH抗体文库，只需3-4周即可完成。
2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物，干冰运输。
驼源抗体文库制备----服务优势
---同时提供免疫库制备服务和天然骆驼/羊驼抗体文库筛选服务
---周期短，约16-20周即可获得高质量的文库和单抗细胞株
---高库容量：有效库容 108 – 109/免疫库；109 – 1011/天然库
---高亲和力抗体制备
---个性化的淘筛策略
---完整的文件追溯体系和QC质控文件
驼源抗体文库制备----实验流程 
| 比较项目 | 骆驼VHH抗体文库 | 羊驼VHH抗体文库 |
| 抗原耐受量 | 高，多种抗原混合，高剂量免疫 | 较高，多种抗原混合中等免疫剂量 |
| 抗血清滴度 | 高 | 高 |
| 中和抗体效价 | 高 | 较高 |
| 抗体亲和力 | 更容易获得高亲和力抗体 | 能够获得高亲和力抗体 |
| 抗原需求量 | 4-6mg，纯度>85% | 2-3mg，纯度>85% |
| 采血量 | 一次可采血100ml | 一次20ml血液 |
| PBMC细胞量 | 高 | 一般 |
| 有效库容 | 高，免疫库108-109 | 高，免疫库107-108 |
| 免疫代价 | 较低 | 高 |
| 小分子抗原反应性 | 高 | 一般 |
驼源抗体文库制备-骆驼VHH抗体库构建服务
卡梅德生物科技(KMD Bioscience)能够为客户提供高质量的、骆驼来源的VHH抗体噬菌体展示文库制备服务。我们坚持采用人用疫苗和生物制药的QbD（Quality by Design）设计原则，在理解和尊重ICH原则的基础上，设计并制备骆驼VHH抗体噬菌体展示文库，为客户提供全程可追溯的产品追溯体系和文件支撑体系。VHH抗体噬菌体展示文库包含抗原设计，动物免疫，文库构建与筛选等主要环节。
---VHH抗体噬菌体展示文库之抗原设计
针对骆驼VHH抗体文库，我们设计了一系列来自于驼源抗体Fc融合表达的人源免疫检查点蛋白。结合我们成熟的Freestyle 293F和Expi CHO细胞悬浮表达平台，我们能够为客户在较短的周期内从基因合成，载体构建到克级蛋白的表达，更多的服务需求，请咨询我们的蛋白表达平台。同时，根据我们的实验结果，我们发现小分子靶蛋白直接与人源Fc片段融合后免疫效果要好于靶蛋白融合羊驼或骆驼Fc片段后免疫结果（具体实验结果，请联系我们的技术人员）。
---VHH抗体噬菌体展示文库之动物免疫
卡梅德生物科技(KMD Bioscience)通过与骆驼和羊驼养殖社建立合作，提供未经免疫的，足龄（28-36月龄）的骆驼或羊驼进行抗原免疫，按照标准免疫方法，免疫4-7针。蛋白抗原按照ELISA血清效价>105标准；小分子抗原免疫ELISA血清效价>104标准。
---VHH抗体噬菌体展示文库之文库构建与筛选
卡梅德生物科技(KMD Bioscience)采用M13噬菌体的pIII蛋白进行VHH抗体(纳米抗体)表面展示。我们的科学家构建了带有Flag和6*His tag双标签的噬菌体载体，同时制备出了具有108转染效率的TG1和XL1-Blue宿主菌感受态，经过2-3次转染与扩增，能够为客户提供有效库容量为108-109,且包装库容为1013-1016/ml颗粒数的高质量VHH抗体展示文库。通过抗原极限施压筛选方式，经过3轮纳米抗体文库淘筛，即可获得多达20-30株具有高亲和力的噬菌体株。通过简单的IPTG诱导，即可在1-2周内获得大量抗体表达产物，以满足客户FACS，细胞活性测试等研究需求。
驼源抗体文库制备---项目流程
| 步骤 | 服务内容 | 周期 |
| Step1：动物免疫 | 1. 准备1只健康、足龄双峰驼(28-36月龄) 2. 免疫骆驼4-7次 3. ELISA检测血清效价，效价满足要求后取外周血；若效价不满足要求，则终止试验 |
6-8周 |
| Step2：抗体cDNA制备（客户可以直接提供细胞，从此步开始） | 1. 总RNA提取 2. 高保真RT-PCR制备cDNA |
3-4周 |
| Step3：构建抗体库 | 1. 引物设计与合成：抗体可变区兼并引物设计、合成 2. 以cDNA为模板，PCR扩增重链抗体基因可变区 3. 噬粒构建与转化：酶切、连接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库 4. 鉴定：随机挑选96个克隆，PCR鉴定阳性率 5. 包装，＞1⨯1013 /ml噬菌体颗粒 |
|
| Step4: 文库淘筛 (3轮) |
1. 抗原极限施压法进行3轮淘筛 2. 鉴定：随机挑选96个克隆，ELISA效价测定 3. 多达96个阳性克隆进行基因测序，挑选10-15个克隆进行原核表达转化 4. 10-15个阳性克隆表达制备VHH抗体上清 |
3-4周 |
| 交付 | 1. 构建与筛选报告，包括测序报告，图片数据； 2. VHH抗体文库2ml，＞1⨯1013 /ml噬菌体颗粒 3. 10-15个阳性克隆表达制备VHH抗体上清 4. 10-15个阳性克隆表达菌种 |
|
2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物，干冰运输。
驼源抗体文库制备----服务优势
---同时提供免疫库制备服务和天然骆驼/羊驼抗体文库筛选服务
---周期短，约16-20周即可获得高质量的文库和单抗细胞株
---高库容量：有效库容 108 – 109/免疫库；109 – 1011/天然库
---高亲和力抗体制备
---个性化的淘筛策略
---完整的文件追溯体系和QC质控文件
驼源抗体文库制备----实验流程
公司介绍：
卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
核心平台：
---噬菌体抗体展示技术平台
卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
---抗体工程技术平台
卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。
多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。
抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。
抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。
---蛋白表达与纯化服务技术平台
卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。
哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。
昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。
原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。
酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。
植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。
---蛋白批量发酵平台
超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。
同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。
---蛋白纯化技术平台：
我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。
---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台
稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。
卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。
卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
核心平台：
---噬菌体抗体展示技术平台
卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
---抗体工程技术平台
卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。
多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。
抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。
抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。
---蛋白表达与纯化服务技术平台
卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。
哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。
昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。
原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。
酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。
植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。
---蛋白批量发酵平台
超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。
同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。
---蛋白纯化技术平台：
我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。
---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台
稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。
卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。
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文献和实验相关实验
在骆驼科动物外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体，该抗体只包含一个重链可变区（VHH）和两个常规的 CH2 与 CH3 区，不像人工改造的单链抗体片段 (scFv) 那样容易相互沾粘，甚至聚集成块。单独克隆并表达出来的 VHH 结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH 晶体为 2.5nm，长 4nm，分子量只有 15KDa，由于其尺寸处于纳米级别，也被称作纳米抗体（Nanobody，Nb），听名字就很牛 B
表达 表达时易形成包涵体，互相沾粘聚集沉淀。 表达量高，表达的抗体具有高水溶性，易复性。 抗体稳定性 易失活，高温或极度PH下失效或分解 高稳定性，高耐性，90℃处理后依然保持较高的活性 免疫原性 较高 较低 组织穿透力 较低 较高，可穿透血脑屏障 半衰期 较长 较短，血清清除速度快 纳米抗体序列优化纳米抗体 VHH
的单链抗体库，与大多数商业化混合库不同，即可用于筛选 κ 型抗体，也可用于筛选 λ 型的高亲和力抗体。2. 序列正确性高，来源丰富，库容可达十亿级别。3. 两步法建库，先连入轻链再连入重链，保证了库的高质量和多样性。4. 带有 His 标签，可直接用 phagemid 表达抗体，His 标签纯化。普健生物也可提供兔源 scFv 抗体库文库构建及淘选技术服务。案例展示1.动物免疫：3 只兔子，经四轮免疫后抗血清效价如下图： 3 只兔子免疫血清效价结果2.兔免疫库的构建：库容达 1.01×109 pfu
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