T7 RNA聚合酶 T7 RNA Polymerase GM

产品信息

 

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade（50 U/μL）	10624ES86	2500 U	2655
	10624ES90	5000 U	4855
	10624ES96	25000 U	20155
	10624ES97	50000 U	36255

 

产品描述

 

本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

注：G*为RNA转录的第一个碱基。

本品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供。 

 

产品性质

 

来源（Source）	重组E. coli
最适温度（Optimum Temperature）	37℃
宿主核酸残留（Host nucleic acid residue）	<10 fg/U
宿主蛋白残留（Host protein residue）	<50 ppm
病原体（HBV/ HCV/HIV）检测	无检出
RNA酶残留（RNase residue）	阴性
内毒素残留（Endotoxin residue）	＜10 EU/mg
支原体检测（Mycoplasma detection）	无检出
无菌检测（Sterility testing）	无检出
储存缓冲液（Storage Buffer）	50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃
活性单位定义（Unit Definition）	在37℃、pH 8.0的条件下，1 h内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

注：具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告

 

产品组分

 

编号	组分	产品编号/规格
		10624ES86 (2500 U)	10624ES90 (5000 U)	10624ES96 (25000 U)	10624ES97 (50000 U)
10624-A	T7 RNA polymerase (50 U/μL)	50 μL	100 μL	500 μL	1 mL
10624-B	10×Transcription Buffer	500 μL	1 mL	5 mL	10 mL

注：10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl₂和100 mM DTT，但不含有NTP，如需请购买本公司NTP set solution 10133。

 

产品应用

 

1. 单链 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA前体，以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针）

2. 以（Cap analog）为引物合成Capped mRNA 

 

运输和保存方法

 

干冰运输。-20℃保存，有效期一年。

 

应用实例

 

1、按下列体系配制反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
10×Transcription Buffer	2	1×
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)	0.4 each	2 mM each
T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	0.5-1	-
RNase inhibitor (40 U/μL)	1	-
RNase free H2O	Up to 18	-
模板DNA	2 (100 ng-1μg)	-

【注】：
① DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

② Buffer和水建议放置到室温，然后开始使用，反应于室温下配制，防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。

③ 若转录长度< 100 nt，模板投入量可增加至2 μg。

④ RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。

⑤ 为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。

2、37℃反应1-2 h（若转录长度≤ 100 nt，增加时间至4-8 h）。

3、反应结束后，使用2 U DNaseⅠ（无RNase）37℃、15 min去除DNA模板。

4、转录产物纯化：体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化（12602），以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法（具体操作步骤可联系Yeasen索取）。

 

注意事项

 

1、DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板；PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

3、在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB211025