LipoD293™体外DNA转染试剂升级版

利用我们的创新和专有的脂质体共轭结合技术，专门设计和配制了LipoD293™ (Ver. II)转染试剂，它添加了专有的增强剂促进HEK293细胞和其它的哺乳动物细胞的转染。作为DNA转染试剂的第二代脂质体产品，对HEK293相关细胞和其它哺乳动物细胞， LipoD293™ (Ver. II)转染试剂提供了极高的转染效率，并且细胞毒性 低。LipoD293™ (Ver. II)转染试剂，通过加入转染增强肽的方式，使基因转 染效率提高了3～4倍。LipoD293™(Ver. II)转染试剂，1.0ml，能在24孔板中足够完成666次转染，在6孔板中足够完成333次转染。

图 1. 示意图说明LipoD293™转染试剂(升级版)增强转染的原理。

产品特点：
– 难转染细胞的最佳选择
– 产生高滴度的病毒
– 对长DNA片段同样有效(最长可达180kb)
– 对悬浮293细胞同样有效(例如293F, 293H等)
– 产生高 水平的重组蛋白
– 血清和抗体不影响转染效率
– 对单DNA和多DNA片段的共转染特别有效
– 物美价廉

储存条件：
4⁰C储存。若储藏合适，产品的稳定性能保持12个月以上。

LipoD293™体外DNA转染试剂(升级版)与市场主导品牌产品转染效率的比较。

LipoD293™试剂(升级版)、lipofectamine 2000 (L2K)和Fugene HD对HepG2细胞转染效率的比较。右图：使用以上转染试剂将GFP的cDNA (pEGFP-N3)按照生产商的提供的转染步骤转染到HepG2细胞 (在胶原预处理的培养皿中培养）。在转染48小时之后，用流式细胞仪检测GFP阳性细胞(%)和荧光强度。左图：血清和抗生素存在的条件下能提高LipoD293试剂(升级版)对在HepG2细胞的转染效率。通过三种不同的条件下转染HepG2细胞(生长在胶原处理的培养皿上) —无血清和抗生素，10%血清和抗生素的存在，转染5小时后换液和不换液。


LipoD293™试剂(升级版)，Lipofectamine 2000 (L2K), TransIT和Fugene 6对CHO细胞转染效率的比较。右图：使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的cDNA (phRL-CMV)和绿色荧光蛋白GFP的cDNA按照生产商的提供的转染步骤分别转染到CHO细胞。在转染24小时后，荧光素酶的活性使用Beckman公司的化学发光监测器测定；GFP阳性细胞率使用BD公司的FACS检测。左图：LipoD293试剂(升级版)和Lipofecatmine 2000 (L2K), TransIT以及Fugene 6的价格比较(美元/1000微升)。所有的价格是从生产制造商的网站上收集的。

LipoD293™试剂(升级版)和Lipofectamine 2000 (L2K)对在难转染细胞(原代大鼠动脉平滑肌细胞)的转染效率的比较。制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用LipoD293™试剂(左图)和Lipofecatmine 2000(L2K,右图)分别将GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染24小时后，用尼康Eclipse 2000 荧光显微镜检测GFP荧光，以此来评价转染效率。上面的图片由芝加哥大学的肺和重症护理系的Nickolai Dulin博士友情提供的。


LipoD293™试剂和Fugene HD对难转染细胞LNCap细胞转染效率的比较。LNCap细胞的培养和传代严格由ATCC建议的操作步骤进行，与pBabe-hygro-SSeCKs (1.5ug)和pEGFP-N3 (1:1，共1.0 微克)共转染(6孔板中每孔的量)，并用 LipoD293™试剂(左图)和Fugene HD (右图)分别按照生产制造商的科学实验步骤进行转染。转染24小时后，用尼康Eclipse 2000 荧光显微镜检测GFP荧光，以此来评价转染效率。上面的图片由罗斯威尔公园癌症研究所(Roswell Cancer Institute)的Lyn Gao博士友情提供的。


LipoD293™试剂对难转染细胞像HepG2和SaoS-2上出色的转染效率。在血清和抗生素的存在下，HepG2和SaoS-2细胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分别转染达到95%的细胞融合。转染48小时后，分别通过Zeiss 510激光共聚焦显微镜和 β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测效率。



LipoD293™试剂和 293fectin对HEK293细胞转染效率的比较。用LipoD293™体外DNA转染试剂(Ver. II)(上图)和受欢迎的品牌产品Invitrogen公司的293fectin™(下图)转染pEGFP-C1质粒到HEK293细胞中。转染24小时后，细胞的尼康Eclipse荧光显微镜DIC成像图(左侧)和荧光成像图(右侧)。


LipoD293™试剂和 293fectin，Xfect和Fugene 6转染试剂对悬浮HEK293F产生蛋白质效率的比较。30毫升的293F细胞分别使用LipoD293™试剂、293fectin、Xfect和Fugene 6等转染试剂按照生产商的标准转染步骤将pEGFP-6xHis质粒导入细胞表达，用量为LipoD293™试剂，20微克，所有其他三种转染试剂均使用30微克质粒DNA。转染48小时后，使用尼康荧光显微镜GFP荧光进行成像（左侧四幅图），A：LipoD293； B：293fectin；C：Xfect和D：Fugene 6.  带有6xHis标记的 GFP荧光蛋白使用Ni-NTA亲和柱技术实现分离。5微升洗脱液载入SDS-PAGE凝胶电泳分离并进行Coomassie亮蓝染色(右上图E)，道1为LipoD293293、道2为标准蛋白分子、道3为Xfect、道4为293fectin和道5为Fugene 6。这四种转染试剂产生蛋白质的效率被进一步定量（见右下图F）。



LipoD293™试剂(升级版)和Lipofecatmine LTX (LTX)产生慢病毒的比较。通过LipoD293™试剂(升级版)和Lipofectamine LTX (LTX)试剂将三个cDNAs共转染进293T细胞。一个GFP载体，pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用来测定慢病毒的滴度。在24孔板中每孔加入1×10^5 293T细胞，其次是分别添加不同量的慢定都上清液，1 微升(上图)和10微升(下图)。5天后，细胞通过流式细胞仪检测。右上角的数字表明转导的细胞的百分比来测定慢病毒的滴度。由LipoD293™ and LTX产生的慢病毒的滴度被量化，分为是8×10^6和3×10^6tu/ml 。