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- Xybio
- 上海
- P1531
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
LBA4404 Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：LBA4404根癌农杆菌
别称: LBA4404 Strain
抗性：Rif+Str
培养基：YEB
菌株类别：农杆菌
培养条件：28℃，有氧，YEB
质粒转化：电转、化转
保存方式：30%甘油，-20℃
基本应用：转基因
质粒简介
BA4404菌株为Ach5型背景的根癌农杆菌，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 pAL4404型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予LBA4404菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的LBA4404化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1021/pTRCmob棒状杆菌表达质粒 |
| P4553/pTRCmob质粒菌种 |
| P1022/pEC-XK99E棒状杆菌表达质粒 |
| P4554/pEC-XK99质粒菌种 |
| P1118/pART27地杆菌表达质粒 |
| P0365/pRADK奇球菌表达质粒 |
| P0662/pBT2葡萄球菌表达质粒 |
| P1030/pLI50金黄色葡萄球菌单拷贝整合质粒 |
| P1813/pCasSA金黄色葡萄球菌温敏基因编辑质粒 |
| P1919/pMAD金黄色葡萄球菌温敏基因编辑质粒 |
| P1893/pECTO金黄色葡萄球菌染色体基因异位互补质粒 |
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文献和实验Agrobacterium growth and transformation (农杆菌培养及转化)
. The most commonly used strains LBA4404 and GV3101 carry chromosomal resistance to rifampicin, each has a Ti-plasmid (carrying vir [virulence] genes) which encodes another antibiotic resistance. This is summarised in the table below. GV3101 are the same as ‘C58C1RifR
相关专题 DNA连接与转化 农杆菌感受态细胞的制备 1.挑取少许农杆菌LBA4404，接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中，28℃、200r/mim培养过夜。 2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养，直至OD800 为0.5左右。 3.将培养物置冰浴中30min，4℃、5000r/min、离心5min，弃去上清液。 4.用10ml冷
mg/l +6-BA 3 mg/l，500ml （固体），分装在250ml三角瓶中，每瓶100ml；高压灭菌 抗生素母液：Kan 100mg/ml 5ml ; Cb 500mg/ml 5ml 抽滤灭菌，分装在Ep 管中，每管1ml, -20℃保存。 实验材料】：烟草无菌苗叶片。 【方法】： 1. 取普通烟草无菌苗叶片，用锋利手术刀片切去边缘和主叶脉，叶片切成0.5 cm见方的小块（使四周均有伤口），备用。 2. 取培养过夜的农杆菌LBA
