pCAMBIA3301/LBA4404根癌农杆菌

基本信息
名称：pCAMBIA3301/LBA4404根癌农杆菌
别称:  pCAMBIA3301/LBA4404 Strain
抗性：Rif+Kan
培养基：YEB
菌株类别：农杆菌
培养条件：28℃，有氧，YEB
质粒转化：电转、化转
保存方式：30%甘油，-20℃
基本应用：转基因

质粒简介
 LBA4404菌株为Ach5型背景的根癌农杆菌，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 pAL4404型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予LBA4404菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。


质粒图谱


质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4558/pFW5质粒菌种

P1612/pGM1190链霉菌表达质粒

P0305/pBBR1MCS-1广宿主表达质粒

P0306/pBBR1MCS-2广宿主表达质粒

P0307/pBBR1MCS-3广宿主表达质粒

P0308/pBBR1MCS-4广宿主表达质粒

P0309/pBBR1MCS-5广宿主表达质粒

P0310/pBBR1MCS-Spe广宿主表达质粒

P0525/pBBR1MCS2-pAmp-EGFP广宿主表达质粒

P0676/pBBR1MCS2-Tac-mCherry广宿主表达质粒

P1293/pBBR1MCS2-Tac-EGFP广宿主表达质粒

P1637/pMP2444广宿主荧光表达质粒