- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1514
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCR-XL-TOPO-L1CAM
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：EBY100酿酒酵母展示菌
别称: pCR-XL-TOPO-L1CAM
质粒简介
EBY100质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0225/pRS403酿酒酵母质粒 |
| P0457/pRS423酿酒酵母质粒 |
| P0458/pRS424酿酒酵母质粒 |
| P0481/pRS425酿酒酵母质粒 |
| P0459/pRS426酿酒酵母质粒 |
| P0226/p426gal酿酒酵母质粒 |
| P0824/pYX212酿酒酵母质粒 |
| P1151/pYIplac211酿酒酵母质粒 |
| P0825/pKLAC1乳酸酵母质粒 |
| P0836/YCp50出芽酵母质粒 |
| P1766/pDUAL-HFG1酿酒酵母质粒 |
| P1616/pY26TEF-GPD酵母双框质粒 |
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文献和实验酿酒酵母感受态细胞的制备 （1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。 （2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。 （3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。 （4）在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。 （5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。 （6）用10 ml 洗液洗酵母
ml。 室温保存1-2个月。 **也可以所有组分一起灭菌，但是可能会发生焦化作用，然而焦化作用不会引起任何问题。 生长选择合成培养基(Selective Growth Synthetic Media) 2x (SD – CAA) 1)用于EBY100菌株配套 pYD 系列载体 ，或者二配体酵母配套pPNL20 和pPNL30 载体 10 g/L 酪蛋白水解物casamino acids (-ade, -ura, -trp
相关专题 酵母细胞的培养专题 目的 认识酵母菌 的形态特征，了解培养酵母菌的方法。 实验前的思考 人类认识和利用酵母菌 的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。约在6000年前，就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。 材料器具 甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽;显微
