pCIG-CNGA1-G622A人源基因质粒

基本信息
名称：pCIG-CNGA1-G622A人源基因质粒
别称: CNCG;CNG1;RP49;CNCG1;CNG-1;RCNC1;RCN
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介：详询

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                8266 bp ds-DNA     circular SYN 27-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 8266)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 27, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8266
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     rep_origin      complement(42..630)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(801..1661)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(1662..1766)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     misc_feature    1797..3468
                     /label=CAG promoter
     CDS             3529..5625
                     /codon_start=1
                     /label=CNGA1-G622A
                     /translation="MKLSMKNNIINTQQSFVTMPNVIVPDIEKEIRRMENGACSSFSED
                     DDSASTSEESENENPHARGSFSYKSLRKGGPSQREQYLPGAIALFNVNNSSNKDQEPEE
                     KKKKKKEKKSKSDDKNE-NKNDPEKKKKKKDKEKKKKEEKSKDKKEEEKKEVVVIDPSGN
                     TYYNWLFCITLPVMYNWTMVIARACFDELQSDYLEYWLILDYVSNIVYLIDMFVRTRTG
                     YLEQGLLVKEELKLINKYKSNLQFKLDVLSLIPTDLLYFKLGWNYPEIRLNRLLRFSRM
                     FEFFQRTETRTNYPNIFRISNLVMYIVIIIHWNACVFYSISKAIGFGNDTWVYPDINDP
                     EFGRLARKYVYSLYWSTLTLTTIGETPPPVRDSEYVFVVVDFLIGVLIFATIVGNIGSM
                     ISNMNAARAEFQARIDAIKQYMHFRNVSKDMEKRVIKWFDYLWTNKKTVDEKEVLKYLP
                     DKLRAEIAINVHLDTLKKVRIFADCEAGLLVELVLKLQPQVYSPGDYICKKGDIGREMY
                     IIKEGKLAVVADDGVTQFVVL-SDGSYFGEISILNIKGSKAGNRRTANIKSIGYSDLFCL
                     SKDDLMEALTEYPDAKTMLEEKGKQILMKDGLLDLNIANAGSDPKDLEEKVTRMEGSVD
                     LLQTRFARILAEYESMQQKLKQRLTKVEKFLKPLIDTEFSSIEGPGAESGPIDSTDYKD
                     DDDK"
     misc_feature    5660..6238
                     /label=IRES2
                     /note="internal ribosome entry site (IRES) of the 
                     encephalomyocarditis virus (EMCV)"
     CDS             6239..6958
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /label=EGFP
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     polyA_site      7115..7170
                     /label=-beta-globin poly(A) signal
                     /note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
     promoter        7734..7929
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 early promoter"
     rep_origin      7780..7915
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     polyA_signal    7935..8069
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
        1 caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc
       61 cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta
      121 taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg
      181 ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc
      241 tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac
      301 gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac
      361 ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg
      421 aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga
      481 agnacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt
      541 agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag
      601 cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct
      661 gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg
      721 atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat
      781 gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc
      841 tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg
      901 gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct
      961 ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca
     1021 actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg
     1081 ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg
     1141 tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc
     1201 cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag
     1261 ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg
     1321 ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag
     1381 tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat
     1441 agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg
     1501 atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca
     1561 gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca
     1621 aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat
     1681 tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag
     1741 aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgggtcgaca
     1801 ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata
     1861 tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga
     1921 cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt
     1981 ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt
     2041 gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca
     2101 ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt
     2161 catcgctatt accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc
     2221 cccctcccca cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg
     2281 ggcggggggg gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg
     2341 ggcgaggcgg agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt
     2401 tatggcgagg cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt
     2461 cgctgcgttg ccttcgcccc gtgccccgct ccgcgccgcc tcgcgccgcc cgccccggct
     2521 ctgactgacc gcgttactcc cacaggtgag cgggcgggac ggcccttctc ctccgggctg
     2581 taattagcgc ttggtttaat gacggctcgt ttcttttctg tggctgcgtg aaagccttaa
     2641 agggctccgg gagggccctt tgtgcggggg ggagcggctc ggggggtgcg tgcgtgtgtg
     2701 tgtgcgtggg gagcgccgcg tgcggcccgc gctgcccggc ggctgtgagc gctgcgggcg
     2761 cggcgcgggg ctttgtgcgc tccgcgtgtg cgcgagggga gcgcggccgg gggcggtgcc
     2821 ccgcggtgcg ggggggctgc gaggggaaca aaggctgcgt gcggggtgtg tgcgtggggg
     2881 ggtgagcagg gggtgtgggc gcggcggtcg ggctgtaacc cccccctgca cccccctccc
     2941 cgagttgctg agcacggccc ggcttcgggt gcggggctcc gtacggggcg tggcgcgggg
     3001 ctcgccgtgc cgggcggggg gtggcggcag gtgggggtgc cgggcggggc ggggccgcct
     3061 cgggccgggg agggctcggg ggaggggcgc ggcggccccc ggagcgccgg cggctgtcga
     3121 ggcgcggcga gccgcagcca ttgcctttta tggtaatcgt gcgagagggc gcagggactt
     3181 cctttgtccc aaatctgtgc ggagccgaaa tctgggaggc gccgccgcac cccctctagc
     3241 gggcgcgggg cgaagcggtg cggcgccggc aggaaggaaa tgggcgggga gggccttcgt
     3301 gcgtcgccgc gccgccgtcc ccttctccct ctccagcctc ggggctgtcc gcggggggac
     3361 ggctgccttc gggggggacg gggcagggcg gggttcggct tctggcgtgt gaccggcggc
     3421 tctagagcct ctgctaacca tgttcatgcc ttcttctttt tcctacagct cctgggcaac
     3481 gtgctggtta ttgtgctgtc tcatcatttt ggcaaagaat tgctcgagat gaaactatcc
     3541 atgaagaaca atattatcaa tacacagcag tcttttgtaa ccatgcccaa tgtgattgta
     3601 ccagatattg aaaaggaaat acgaaggatg gaaaatggag catgcagctc cttttctgag
     3661 gatgatgaca gtgcctctac atctgaagaa tcagagaatg aaaaccctca tgcaaggggt
     3721 tcctttagtt ataagtcact cagaaaggga ggaccatcac agagggagca gtacctgcct
     3781 ggtgccattg cactttttaa tgtgaacaac agcagcaata aggaccagga accagaagaa
     3841 aaaaagaaaa agaaaaaaga aaagaagagc aagtcagatg ataaaaacga aaataaaaac
     3901 gacccagaga agaaaaagaa gaaaaaggac aaagagaaga aaaagaaaga ggagaaaagc
     3961 aaagataaga aagaagagga gaagaaagaa gttgtggtta ttgatccctc gggaaacaca
     4021 tattacaact ggctgttttg catcacatta cctgttatgt acaactggac aatggttatt
     4081 gccagagcat gttttgatga acttcaatct gattacctag aatattggct cattttggat
     4141 tacgtatcaa acatagtcta tttaatcgat atgtttgtac gaacaaggac aggttaccta
     4201 gaacaaggac tgctggtaaa ggaagaactt aaactcataa ataaatataa atccaacttg
     4261 caatttaaac ttgatgttct gtcactgata ccaactgatt tgctgtattt taagttaggg
     4321 tggaactatc cagaaattag attaaacagg ttgttacggt tctctcgtat gtttgagttc
     4381 ttccagagaa cagaaacaag gacaaactat ccaaacatct tcaggatttc caaccttgtt
     4441 atgtatatcg tcatcattat ccactggaat gcatgtgtgt tctactctat ttctaaagct
     4501 attggatttg gaaatgatac atgggtctac cctgatatta atgatcctga atttggccgt
     4561 ttggctagaa aatacgtata cagcctttac tggtctacac tgactttgac taccattggt
     4621 gaaacacccc ctcccgtgag ggattctgag tatgtctttg tggtggttga tttcctaatt
     4681 ggagtgttaa tttttgctac catcgttggt aacataggtt ctatgatttc caacatgaat
     4741 gcagccagag cagaatttca agcaagaatt gatgctatca agcaatatat gcattttcga
     4801 aatgtaagca aagatatgga aaagagggtt attaaatggt ttgactacct gtggaccaac
     4861 aaaaaaacag ttgatgagaa agaagtctta aagtatctac ctgataaact aagagcagaa
     4921 attgccatca acgttcactt agacacatta aaaaaggtac gcatttttgc tgattgtgaa
     4981 gctggtctgt tggtggagtt ggtcttgaaa ttgcaacccc aagtctacag tcctggagat
     5041 tatatttgca agaaagggga tatcggacga gagatgtaca ttatcaagga aggcaaactc
     5101 gctgtggtgg cagatgatgg agtcactcag tttgtggtat tgagcgatgg cagctacttc
     5161 ggtgagatca gcattcttaa cattaaaggg agcaaagctg gcaatcgaag aacggccaat
     5221 attaaaagta ttggctactc agacctgttc tgtctctcaa aagatgacct catggaagct
     5281 ctaactgagt acccagatgc caaaactatg ctggaagaga aagggaagca gattttaatg
     5341 aaagatggtc tactggatct aaacattgca aatgctggca gtgatcctaa agatcttgaa
     5401 gagaaggtta ctcgaatgga ggggtcagta gacctcctgc aaaccaggtt tgcccgaatc
     5461 ttggctgagt atgagtccat gcagcagaaa ctgaaacaaa gattaaccaa ggttgagaaa
     5521 tttctgaaac cgcttattga cacagaattt tcaagtattg agggacctgg agcggaaagt
     5581 gggcccatcg actctacaga ttacaaggat gacgacgata agtaggaatt cctgcagccc
     5641 ggccgctacg taaattccgc cccccccccc cctaacgtta ctggccgaag ccgcttggaa
     5701 taaggccggt gtgcgtttgt ctatatgtta ttttccacca tattgccgtc ttttggcaat
     5761 gtgagggccc ggaaacctgg ccctgtcttc ttgacgagca ttcctagggg tctttcccct
     5821 ctcgccaaag gaatgcaagg tctgttgaat gtcgtgaagg aagcagttcc tctggaagct
     5881 tcttgaagac aaacaacgtc tgtagcgacc ctttgcaggc agcggaaccc cccacctggc
     5941 gacaggtgcc tctgcggcca aaagccacgt gtataagata cacctgcaaa ggcggcacaa
     6001 ccccagtgcc acgttgtgag ttggatagtt gtggaaagag tcaaatggct ctcctcaagc
     6061 gtattcaaca aggggctgaa ggatgcccag aaggtacccc attgtatggg atctgatctg
     6121 gggcctcggt acacatgctt tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaaacg tctaggcccc
     6181 ccgaaccacg gggacgtggt tttcctttga aaaacacgat gataatatgg ccacaaccat
     6241 ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg ggtggtgccc atcctggtcg agctggacgg
     6301 cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc cggcgagggc gagggcgatg ccacctacgg
     6361 caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac cggcaagctg cccgtgccct ggcccaccct
     6421 cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc taccccgacc acatgaagca
     6481 gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc caggagcgca ccatcttctt
     6541 caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc cgaggtgaag ttcgagggcg acaccctggt
     6601 gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt caaggaggac ggcaacatcc tggggcacaa
     6661 gctggagtac aactacaaca gccacaacgt ctatatcatg gccgacaagc agaagaacgg
     6721 catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac ggcagcgtgc agctcgccga
     6781 ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg ctgctgcccg acaaccacta
     6841 cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga ccccaacgag aagcgcgatc acatggtcct
     6901 gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac tctcggcatg gacgagctgt acaagtaaag
     6961 cggccgcaat tcactcctca ggtgcaggct gcctatcaga aggtggtggc tggtgtggcc
     7021 aatgccctgg ctcacaaata ccactgagat ctttttccct ctgccaaaaa ttatggggac
     7081 atcatgaagc cccttgagca tctgacttct ggctaataaa ggaaatttat tttcattgca
     7141 atagtgtgtt ggaatttttt gtgtctatca ctcggaagga catatgggag ggcaaatcat
     7201 ttaaaacatc agaatgagta tttggtttag agtttggcaa catatgccca tatgctggct
     7261 gccatgaaca aaggttggct ataaagaggt catcagtata tgaaacagcc ccctgctgtc
     7321 cattccttat tccatagaaa agccttgact tgaggttaga ttttttttat attttgtttt
     7381 gtgttatttt tttctttaac atccctaaaa ttttccttac atgttttact agccagattt
     7441 ttcctcctct cctgactact cccagtcata gctgtccctc ttctcttatg gagatccctc
     7501 gacctgcacc gtcgaccagc tggtcgacgg tgcaccgtcg accagcttgg cgtaatcatg
     7561 gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc
     7621 cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc
     7681 gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagcgga tccgcatctc
     7741 aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc
     7801 agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag
     7861 gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc
     7921 ttttgcaaaa agctaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca
     7981 tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac
     8041 tcatcaatgt atcttatcat gtctggatcc gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg
     8101 gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc
     8161 ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac
     8221 agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccag
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0503/pCXWB-EBNA1人源基因质粒

P0504/pCXLE-EGFP人源基因质粒

P0496/pEGFP-Rnd1人源基因质粒

P0497/pEGFP-Rnd2人源基因质粒

P1768/pEGFP-KIF3b人源基因质粒

P0544/pCDNA3-HA-p53人源基因质粒

P2919/pCDNA3.1-P53-N-GST人源基因质粒

P2938/pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒

P0545/pCDNA3-mTOR人源基因质粒

P0546/pCMV-FLAG-TRAF3人源基因质粒

P0547/pCDEF-FLAG-β-catenin人源基因质粒

P2671/pCDEF-FLAG-β-catenin-S675A人源基因质粒

P0548/pCDEF-FLAG-IRF3人源基因质粒