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- Xybio
- 上海
- P1465
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
EPI400 Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：EPI400大肠克隆菌
别称: EPI400 Strain
抗性：
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于基因克隆
备注：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0977/pSuper-puro哺乳干扰质粒 |
| P4203/pSuper-GFP-NEO哺乳干扰质粒 |
| P1288/pSilencer-U6-Puro哺乳干扰质粒 |
| P1747/pSilencer 1.0-U6哺乳干扰质粒 |
| P0371/pSilencer 2.1-U6-Neo哺乳干扰质粒 |
| P1148/pSilencer3.1-H1-Stuffer-Neo哺乳干扰质粒 |
| P1615/pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro哺乳干扰质粒 |
| P1256/pSilencer4.1-CMV-Neo哺乳干扰质粒 |
| P1763/pSilencer 4.1-CMV puro-Stuffer哺乳干扰质粒 |
| P1841/pSD1211-U6-shRNA哺乳干扰质粒 |
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文献和实验一步实现单拷贝到高拷贝的转换－－Copy Control克隆技术（附图）
这个载体含有两个复制起始位点（如图1）：单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子，和诱导型的高拷贝oriV。 OriV的启动，需要trfA基因产物，trfA基因既不在pCC1 Vector上，也不在其他常规用来克隆的大肠杆菌菌株中，这个基因由CopyControl 的第二个重要元件—— TransforMax EPI300 E.coli菌株提供。 （二）TransforMax EPI300 E.coli. 这是一个工程菌株，含有受诱导启动子严谨控制的trf A基因，在诱导
一步实现单拷贝到高拷贝的转换---CopyControl克隆技术
统可以用来构建PCR 克隆 ，对于BAC，fosmid文库等大型质粒格外有用。 CopyControl 克隆 系统有两个重要的成分： 1．CopyControl pCC1 Vector. 这个载体含有两个复制起始位点（如图1）：单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子，和诱导型的高拷贝oriV。 OriV的启动，需要trfA基因产物，trfA基因既不在pCC1 Vector上，也不在其他常规用来 克隆 的大肠杆菌菌株中，这个基因由CopyControl 的第二个重要元件——
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克隆菌
