- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1453
- 2025年07月03日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
BC132756.1;PRO34300
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：DH5αλpir大肠克隆菌
别称: BC132756.1;PRO34300
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 备注: | 600bp |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | PCR模板 |
| 基因种属： | 人 |
| 基因类型： | cDNA |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCR4-TOPO-CDH29(human)
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1737/pCDNA3.1-mCherry哺乳荧光质粒 |
| P1772/Ai9哺乳荧光质粒 |
| P2963/NLS-AmCherry1-NES reporter (pDN160)哺乳荧光质粒 |
| P3067/NLS-mCherry-NES reporter (pDN160)哺乳荧光质粒 |
| P4930/pTurboRFP-N1哺乳红色荧光质粒 |
| P4936/pTurboRFP-C1哺乳红色荧光质粒 |
| P3017/mApple-N1哺乳荧光质粒 |
| P0145/pEYFP-N1哺乳荧光质粒 |
| P1579/pCDNA3.1 EYFP H148Q-I152L哺乳荧光质粒 |
| P1196/pECMV-3×FLAG-VENUS哺乳荧光质粒 |
| P1402/mAmetrine-N1哺乳荧光质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验型信息可以判断目的质粒是否可以使用这个感受态细胞来进行扩增，以及是否可以进行目的实验。例如 DH5α基因型：F-, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi-1, gyrA96 , relA1。基因型信息中有 lacZΔM15，说明其表达产物可以与 PUC 质粒编码表达的β-半乳糖苷酶的α肽段实现α互补，因此可以选择用 DH5α感受态来扩增
本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
冲液后，PCR扩增TFPI基因。 (二)TFPI基因的体外重组与测序 以EcoRI和BamHI双酶切扩增出的TFPI基因和pGEM-3Zf(-)质粒，在T4DNA连接酶的作用下，将TFPI基因与pGEM-3Zf(-)质粒重组获得pGEM-3Zf(-)-TFPI克隆质粒，转化大肠杆菌DH5α，涂LBA平板，挑阳性克隆。 为了保证所获基因的准确性，必须对其进行DNA序列测定。现有许多生物技术公司能够提供测序服务，其快捷、方便，且价格合理，为大多数实验室所采用。 (三)表达
