- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P1452
- 2025年07月13日
企业认证
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![pGL4.13[luc2-SV40]哺乳报告质粒](https://img1.dxycdn.com/2021/1019/737/1814899479004030153-14.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pAdEasy
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：BJ5183/pAdEasy-1腺病毒系统菌种
别称: pAdEasy
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0475/pmCherry-N1哺乳荧光质粒 |
| P0151/pmCherry-C1哺乳荧光质粒 |
| P0152/pDsRed-Monomer-N1哺乳荧光质粒 |
| P0332/pDsRed-Express2-N1哺乳荧光质粒 |
| P0717/PA-mCherry1-C1哺乳荧光质粒 |
| P0718/PA-mCherry1-N1哺乳荧光质粒 |
| P0869/pDsRed1-C1哺乳荧光质粒 |
| P0918/pmScarlet-C1哺乳荧光质粒 |
| P0652/pCAG-DsRed1哺乳荧光质粒 |
| P0715/pmGeos-M-C1哺乳荧光质粒 |
| P0716/pmGeos-M-N1哺乳荧光质粒 |
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文献和实验2.5×1010个细胞/ml）。分装，-80℃或液氮保存待用。 2、病毒骨架质粒转化大肠杆菌，扩增，纯化。 3、将1-5ul （约1ug） 线性化的穿梭质粒及1ul（约100ng/ul）病毒骨架质粒（如pAdEasy-1）加入至含约40ul BJ5183电转感受态的EP管中混匀，冰上冷却。 4、将混合物加入电转杯，电击（1250-1500V/mm,5ms）。 5、电击结束取出样品，加入1ml SOC或LB培养液，37℃低速振荡40min。 6、取适当体积的电击转化细胞液涂于数个卡那霉素抗性
(约1µg) 线性化的穿梭质粒及1µl（约100ng/µl）病毒骨架质粒（如pAdEasy-1）加入至含约40µl BJ5183电转感受态的EP管中混匀,冰上冷却。 4 将混合物加入电转杯，电击（1250-1500V/mm,5ms）。 5 电击结束取出样品，加入1ml SOC或LB培养液，37℃低速振荡40min。 6 取适当体积的电击转化细胞液涂于数个卡那霉素抗性平板（25-50mg/ml），37℃培养16-20hr。 7 次日挑取平板上长出的菌落（选择
、TCID50、PFU Page 16： 1. pShuttle-CMV图谱 2. 病毒滴度测定 3. 重组腺病毒质粒转染 4. 重组腺病毒传代 Page 17： 1. 噬斑纯化 2. Adeno-X系统腺病毒包装protocol 3. PCR鉴定重组载体的缺陷 4. Sequences of pAdTrack-CMV and pAdEasy-1 5. BJ5183中质粒提取 Page 18： 1. 重组后质粒鉴定 2. BJ5183细菌的验证 3. 腺病毒
