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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pEU-E01-MCS
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pEU-E01-MCS无细胞类表达质粒
别称: pEU-E01-MCS
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 质粒分类: | 无细胞表达质粒 |
| 质粒大小: | 3747bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 5'测序引物: | Sp6:ATTTAGGTGACACTATAGAA |
质粒属性
| 载体宿主: | 无细胞类 |
|---|---|
| 载体用途: | 蛋白表达 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
pEU-E01-MCS质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
OCUS Exported 3747 bp ds-DNA circular SYN 11-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEU-E01-MCS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3747)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sunday, September 11, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3747
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 1..19
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
primer_bind complement(834..850)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 858..874
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(882..912)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 927..948
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(1236..1824)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1995..2855)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIRYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2856..2960)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 atttaggtga cactatagaa ctcacctatc tccccaacac ctaataacat tcaatcactc
61 tttccactaa ccacctatct acatcaccaa gatatcacta gttctcgagc tcggtacctg
121 tccgcggtcg cgacgtacgc gggcggccgc cataaattgg atccatatat agggcccggg
181 ttataattac ctcaggtcga cgtcccatgg ttttgtatag aatttacggc tagcgccgga
241 tgcgacgccg gtcgcgtctt atccggcctt cctatatcag gcggtgttta agacgccgcc
301 gcttcgccca aatccttatg ccggttcgac gactggacaa aatactgttt atcttcccag
361 cgcaggcagg ttaatgtacc accccagcag cagccggtat ccagcgcgta tataccttcc
421 ggcgtacctt tgccctccag cgatgcccag tgaccaaagg cgatgctgta ttcttcagcg
481 acagggccag gaatcgcaaa ccacggtttc agtggggcag gggcctcttc cggcgattct
541 tactagctag tatgcatagg tgctgaaata taaagtttgt gtttctaaaa cacacgtggt
601 acgtacgata acgtacagtg tttttccctc cacttaaatc gaagggtagt gtcttggagc
661 gcgcggagta aacatatatg gttcatatat gtccgtaggc acgtaaaaaa agcgagggat
721 tcgaattccc ccggaacccc cggttggggc ccacgcctcg atcgagcaaa aaaaaaaaaa
781 aagaaaaaaa aaaaaaaaaa aagctttccc gcggccagct tggcgtaatc atggtcatag
841 ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc
901 ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc
961 tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa
1021 cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcact cactgactcg
1081 ctgcgctcgg tcgctcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg
1141 ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag
1201 gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac
1261 gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga
1321 taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt
1381 accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc
1441 tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc
1501 cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta
1561 agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat
1621 gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca
1681 gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct
1741 tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt
1801 acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct
1861 cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc
1921 acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa
1981 acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta
2041 tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc
2101 ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat
2161 ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta
2221 tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt
2281 aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt
2341 ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg
2401 ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc
2461 gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc
2521 gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagcgtatg
2581 cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga
2641 actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta
2701 ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct
2761 tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag
2821 ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga
2881 agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat
2941 aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc
3001 attattatca tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg
3061 cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct
3121 tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc
3181 gggtgtcggg gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat
3241 tcgacgctct cccttatgcg actcctgcat taggaagcag cccagtagta ggttgaggcc
3301 gttgagcacc gccgccgcaa ggaatggtgc atgcaaggag atggcgccca acagtccccc
3361 ggccacgggg cctgccacca tacccacgcc gaaacaagcg ctcatgagcc cgaagtggcg
3421 agcccgatct tccccatcgg tgatgtcggc gatataggcg ccagcaaccg cacctgtggc
3481 gccggtgatg ccggccacga tgcgtccggc gtagaggatc tggctagcga tgaccctgct
3541 gattggttcg ctgaccattt ccgggtgcgg gacggcgtta ccagaaactc agaaggttcg
3601 tccaaccaaa ccgactctgg cggcagttta cgagagagat gatagggtct gcttcagtaa
3661 gccagatgct acacaattag gcttgtacat actgtcgtta gaacgcggct acaattaata
3721 cataacctta tgtatcatac acatacg
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P0314/pTrc-Taq聚合酶基因质粒 |
| P1152/pAKTaq聚合酶基因质粒 |
| P1411/pET-KOD聚合酶基因质粒 |
| P0315/pET22b-KOD聚合酶基因质粒 |
| P0776/pKOD-3聚合酶基因质粒 |
| P1407/pET16B.Pfu聚合酶基因质粒 |
| P1758/pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase聚合酶基因质粒 |
| P1775/T7opt in pCAGGS(T7 RNA polymerase)聚合酶基因质粒 |
| P3218/pCAG-T7pol聚合酶基因质粒 |
| P2140/DCT.VV.Orf170聚合酶基因质粒 |
| P2637/pK19mobSacB-T7 polymerase聚合酶基因质粒 |
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文献和实验,TaKaRa,有木有;pGM-T,天根,有木有;一些表达载体,使用最广泛的,pET 系列,Novagen 公司(默克)的;有双 MCS 的 Duet 系列载体,Novagen 的;毕赤酵母表达质粒 pPIC3.5k,pPIC9k,pPICZA,pPICZaA 等等,都是 invitrogen 的;另外一些 pYES 酿酒酵母表达系统,也是 invitrogen 的,因此知道常见的质粒是哪个公司的,去他们公司网站上肯定可以找到该质粒的相关信息。在他们公司主页搜索栏直接搜索质粒名称,得到质粒序列,图谱什么的
数据库 方法三:一些重要试剂公司网页 其实也是一些网站,因为这些网站除了得到质粒图谱等信息,还可以得到关于质粒使用方面的信息,因此单独拿出来做一个分类。现在很多质粒,特别是应用比较广泛的质粒都一些公司商业化的质粒,基本是由一个质粒你就会联想到一个公司的名字。 比如简单的,克隆载体pMD18-T,TaKaRa,有木有;pGM-T,天根,有木有; 一些表达载体,使用最广泛的,pET系列,Novagen公司(默克)的;有双MCS的Duet系列载体,Novagen的;毕赤酵母表达质粒
基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供 5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶 (b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端 6.第一个被分离的Ⅱ类酶是: ( ) (a)EcoK (b)HindⅢ (c)HindⅡ (d)EcoB










