pGM1190链霉菌表达质粒

基本信息
名称：pGM1190链霉菌表达质粒
别称: pGM1190

启动子:	TipA
质粒大小:	7089bp
质粒标签:	N-6xHis/thrombin site/T7 tag，C-6xHis
原核抗性:	Apr
筛选标记:	Tsr
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	链霉菌

质粒属性

载体宿主：	广宿主
载体用途：
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Apr
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pGM1190是一个链霉菌表达载体，通过TipA 启动子驱动目的基因的表达。转化进链霉素的时候请用35℃的温度培养。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7089 bp ds-DNA     circular SYN 22-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7089)
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7089
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     oriT            467..576
                     /note="incP origin of transfer"
     CDS             892..1692
                     /codon_start=1
                     /gene="aac(3)IV"
                     /product="aminoglycoside 3-N-acetyltransferase type IV     
                               "
                     /label=Apr
                     /note="confers resistance to apramycin (Paget and Davies, 
                     1996)"
                     /translation="MSSAVECNVVQYEWRKAELIGQLLNLGVTPGGVLLVHSSFRSVRP
                     LEDGPLGLIEALRAALGPGGTLVMPSWSGLDDEPFDPATSPVTPDLGVVSDTFWRLPNV
                     KRSAHPFAFAAAGPQAEQIISDPLPLPPHSPASPVARVHELDGQVLLLGVGHDANTTLH
                     LAELMAKVPYGVPRHCTILQDGKLVRVDYLENDHCCERFALADRWLKEKSLQKEGPVGH
                     AFARLIRSRDIVATALGQLGRDPLIFLHPPEAGCEECDAARQSIG"
     rep_origin      1994..2582
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     terminator      3163..3197
                     /label=lambda t0 term
                     /note="minimal transcription terminator from phage lambda 
                     (Scholtissek and Grosse, 1987)"
     misc_feature    3232..3332
                     /label=TipA promoter
     misc_feature    3347..3357
                     /label=RBS
     CDS             3376..3393
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
     CDS             3403..3420
                     /codon_start=1
                     /product="thrombin recognition and cleavage site"
                     /label=thrombin site
                     /translation="LVPRGS"
     CDS             3424..3456
                     /codon_start=1
                     /product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
                     /label=T7 tag
                     /note="promotes efficient translation in E. coli"
                     /translation="MASMTGGQQMG"
     CDS             3506..3523
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
     terminator      3688..3736
                     /label=fd terminator
                     /note="central terminator from bacteriophage fd (Otsuka and
                     Kunisawa, 1982)"
     CDS             4079..4888
                     /codon_start=1
                     /label=tsr
                     /note="Thiostrepton resistance protein"
                     /translation="MTELDTIANPSDPAVQRIIDVTKPSRSNIKTTLIEDVEPLMHSIA
                     AGVEFIEVYGSDSSPFPSELLDLCGRQNIPVRLIDSSIVNQLFKGERKAKTFGIARVPR
                     PARFGDIASRRGDVVVLDGVKIVGNIGAIVRTSLALGASGIILVDSDITSIADRRLQRA
                     SRGYVFSLPVVLSGREEAIAFIRDSGMQLMTLKADGDISVKELGDNPDRLALLFGSEKG
                     GPSDLFEEASSASVSIPMMSQTESLNVSVSLGIALHERIDRNLAANR"
     CDS             5451..6893
                     /codon_start=1
                     /gene="rep"
                     /product="replication initiator protein from the 
                     Streptomyces ghanaensis plasmid pSG5"
                     /label=pSG5 Rep
                     /translation="MWKPGEATWGNTCRCNNVHT-CPWCMSRILAVRGSNVQLAADGLAD
                     AGYGLHLGTNTLRHFERMAFGTVRKGMRHGLVAVLHDGWKGAYGSSGRRWRTMRDDFGI
                     IGYERAFEDTFGWGSGWHLHWHTLWVTREVLGPDAQAAFRDALAGAWAAGVESAGGYTV
                     SETCDRPGCSCEGKGHGTDVRPLNGADAADGDAGKQARYLYKDGDKTKGGVAKIGLELA
                     GQNFKAGRGDDRMGPLDLGDAAAAELQRLRRPGPFVEKYREREFGVFQVRKHYRSQNLN
                     RLIKELGIQQDVRTEEEITDDTEGLVAIAVIPAYIWYRYIARVAGRRLDLIKVAETYGL
                     PGVRRLVESWGLVWGKDVLDPPAPEAPAAPGDLDADQMRFEVMSEEEAAFREARRKANE
                     ARTEELAASLDRVRQPKKEAIRPTISLRKRLKPKPVTVDVKTPPPGAASPVCRRCKGKL
                     APVLQPWGRLPGDCLRVDTAVA"
ORIGIN
        1 ggccgtcgac gacgacgcgt ccgcctgcct gcttttggcc ggcgggccgg gccgcggttg
       61 tccgccgggt cggaccggtc ccttggtcga ccgatgcctc ggccacgacg atgctgggcc
      121 cgaagcggta cgcgaacccg tgccgggctg cggcggatcg cggcagcagg agctccccgc
      181 ccgccacggc tggctggatg gtcgcctcac gcgcccgcag gggtgacggc gtgggtgcgg
      241 cggtcagccc cgtgatcggg cgtcagacgg ccgctgaggg accgcgacca cccctccctt
      301 cccgcctgcc gtctttcacc gcccggccgg tccgcagacg ccgtacggcc aggccacgga
      361 ggattacggg cagatggcgc ccacccggca cccgggctgg ggcaccctgg acagcacgaa
      421 ggcccgcccc actcaccggg gcgggccttc gcgttgagct agagttcccg ccagcctcgc
      481 agagcaggat tcccgttgag caccgccagg tgcgaataag ggacagtgaa gaaggaacac
      541 ccgctcgcgg gtgggcctac ttcacctatc ctgcccggct gacgccgttg gatacaccaa
      601 ggaaagtcta cacgaaccct ttggcaaaat cctgtatatc gtgcgaaaaa ggatggatat
      661 accgaaaaaa tcgctataat gaccccgaag cagggttatg cagcggaaaa tgcagctcac
      721 ggtaactgat gccgtatttg cagtaccagc gtacggccca cagaatgatg tcacgctgaa
      781 aatgccggcc tttgaatggg ttcatgtgca gctccatcag caaaagggga tgataagttt
      841 atcaccaccg actatttgca acagtgccgt tgatcgtgct atgatcgact gatgtcatca
      901 gcggtggagt gcaatgtcgt gcaatacgaa tggcgaaaag ccgagctcat cggtcagctt
      961 ctcaaccttg gggttacccc cggcggtgtg ctgctggtcc acagctcctt ccgtagcgtc
     1021 cggcccctcg aagatgggcc acttggactg atcgaggccc tgcgtgctgc gctgggtccg
     1081 ggagggacgc tcgtcatgcc ctcgtggtca ggtctggacg acgagccgtt cgatcctgcc
     1141 acgtcgcccg ttacaccgga ccttggagtt gtctctgaca cattctggcg cctgccaaat
     1201 gtaaagcgca gcgcccatcc atttgccttt gcggcagcgg ggccacaggc agagcagatc
     1261 atctctgatc cattgcccct gccacctcac tcgcctgcaa gcccggtcgc ccgtgtccat
     1321 gaactcgatg ggcaggtact tctcctcggc gtgggacacg atgccaacac gacgctgcat
     1381 cttgccgagt tgatggcaaa ggttccctat ggggtgccga gacactgcac cattcttcag
     1441 gatggcaagt tggtacgcgt cgattatctc gagaatgacc actgctgtga gcgctttgcc
     1501 ttggcggaca ggtggctcaa ggagaagagc cttcagaagg aaggtccagt cggtcatgcc
     1561 tttgctcggt tgatccgctc ccgcgacatt gtggcgacag ccctgggtca actgggccga
     1621 gatccgttga tcttcctgca tccgccagag gcgggatgcg aagaatgcga tgccgctcgc
     1681 cagtcgattg gctgagctca taagttccta ttccgaagtt cctattcgaa atgaccgacc
     1741 aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt
     1801 tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca
     1861 tgctggagtt cttcgcccac cccaaaagga tctaggtgaa gatccttttt gataatctca
     1921 tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga
     1981 tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa
     2041 aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga
     2101 aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt
     2161 taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt
     2221 taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat
     2281 agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct
     2341 tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagcattga gaaagcgcca
     2401 cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag
     2461 agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc
     2521 gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga
     2581 aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca
     2641 tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc tttgagtgag
     2701 ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagcgg
     2761 aagagcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg gccgattcat taatgcagct
     2821 ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg caacgcaatt aatgtgagtt
     2881 agctcactca ttaggcaccc caggctttac actttatgct tccggctcgt atgttgtgtg
     2941 gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgaattgt
     3001 acgtaggcgt cagctacgat gttccgggga ctgctgatcc ggtcagcagg tggaagaggg
     3061 actggattcc aaagttctca atgctgcttg ctgttcttga atggggggtc gttgacgacg
     3121 acatggctcg attggcgcga caagttgctg cgattctcac caataaaaaa cgcccggcgg
     3181 caaccgagcg ttctgaacaa atccagatgg agttctgagg tcattactgg accggatcgg
     3241 ggatctgggc tgagggagcc gacggcacgc ggcggctcac ggcgtggcac gcggaacgtc
     3301 cgggcttgca cctcacgtca cgtgaggagg cagcgtggac ggcgtcagag aagggagcgg
     3361 accatgggca gcagccatca tcatcatcat cacagcagcg gcctggtgcc gcgcggcagc
     3421 catatggcta gcatgactgg tggacagcaa atgggtcgcg gatccgaatt cgagctccgt
     3481 cgacaagctt gcggccgcac tcgagcacca ccaccaccac cactgagatc cggctgctaa
     3541 cccagatcta aagttttgtc gtctttccag acgttagtaa atgaattttc tgtatgaggt
     3601 tttgctaaac aactttcaac agtttcagcg gagtgagaat agaaaggaac aactaaagga
     3661 attgcgaata ataatttttt cacgttgaaa atctccaaaa aaaaaggctc caaaaggagc
     3721 ctttaattgt atcggtttat cagcttgctt tcgaggtgaa tttcttaaac agcttgatac
     3781 cgatagttgc gccgacaatg acaacaacca tcgcccacgc ataaccgata tattcggtcg
     3841 ctgaggcttg cagggagtca aaggccgctt ttgcgggatc tcgtcgaagg cactagaggc
     3901 ctatatgcgg ggatcgaccg cgcgggtccc ggacggggaa gagcggggag ctttgccaga
     3961 gagcgacgac ttccccttgc gttggtgatt gccggtcagg gcagccatcc gccatcgtcg
     4021 cgtagggtgt cacaccccag gaatcgcgtc actgaacaca gcagccggta ggacgaccat
     4081 gactgagttg gacaccatcg caaatccgtc cgatcccgcg gtgcagcgga tcatcgatgt
     4141 caccaagccg tcgcgatcca acataaagac aacgttgatc gaggacgtcg agcccctcat
     4201 gcacagcatc gcggccgggg tggagttcat cgaggtctac ggcagcgaca gcagtccttt
     4261 tccatctgag ttgctggatc tgtgcgggcg gcagaacata ccggtccgcc tcatcgactc
     4321 ctcgatcgtc aaccagttgt tcaaggggga gcggaaggcc aagacattcg gcatcgcccg
     4381 cgtccctcgc ccggccaggt tcggcgatat cgcgagccgg cgtggggacg tcgtcgttct
     4441 cgacggggtg aagatcgtcg ggaacatcgg cgcgatagta cgcacgtcgc tcgcgctcgg
     4501 agcgtcgggg atcatcctgg tcgacagtga catcaccagc atcgcggacc ggcgtctcca
     4561 aagggccagc cgaggttacg tcttctccct tcccgtcgtt ctctccggtc gcgaggaggc
     4621 catcgccttc attcgggaca gcggtatgca gctgatgacg ctcaaggcgg atggcgacat
     4681 ttccgtgaag gaactcgggg acaatccgga tcggctggcc ttgctgttcg gcagcgaaaa
     4741 gggtgggcct tccgacctgt tcgaggaggc gtcttccgcc tcggtttcca tccccatgat
     4801 gagccagacc gagtctctca acgtttccgt ttccctcgga atcgcgctgc acgagaggat
     4861 cgacaggaat ctcgcggcca accgataagc gcctctgttc ctcggacgct cggttgctcg
     4921 acctcgattc gtcagtgatg atcaacagga cccagaaatg gcacgagccc gggattggcc
     4981 tcccgggctc gccgcccccg aaccggcgca gcatgccgag tgaggacgtt tgctctgtga
     5041 cgagcgtacg agagaacagc gcgtcgacac caccgcgccc cgccggaccg aagtgccact
     5101 gcggcacccc gatcgtccac atccccggga agcgccccaa aatctactgc tcggacgcct
     5161 gccgaaagcg cgcaaagcgt ctcattgcgg accagtcacg cagcgtagca agcacgacta
     5221 cagcgggtaa tccggacgcg ggctttagta gtaagggaaa atctccgtcc actgcaggtc
     5281 agagcgctgt aactggaacg ggttctaccc caaacgaggg tgccgcgaca gccgggcggg
     5341 aggacccgcg cgacgagcgg ttcgcccggc gggaccggca ccagacggtg tcgctgaacg
     5401 aggcgttcaa gggctgcggg acccggctca ctgccgggac ggccgagctg atgtggaagc
     5461 cgggcgaggc gacgtggggc aacacgtgcc gctgcaacaa cgtccacacc tgcccgtggt
     5521 gcatgagccg catcctggcc gtacggggct cgaacgtgca gctcgccgcc gacggtctcg
     5581 cggacgccgg gtacgggctg caccttggca cgaacacgtt gcgccacttc gagcgcatgg
     5641 cgttcggcac cgtccgcaag ggaatgcggc acggcctggt cgcggtcttg cacgacggct
     5701 ggaagggcgc gtacggctcg tccggccgcc gctggcgcac gatgcgcgac gacttcggga
     5761 tcatcggcta cgagcgggcc ttcgaggaca ccttcggctg gggctccggc tggcacctgc
     5821 actggcacac gctctgggtc acccgcgagg tgctcggccc ggacgcccag gccgcgttcc
     5881 gcgacgcact cgccggagcc tgggccgccg gggtcgaatc cgcgggcggc tacaccgtca
     5941 gcgagacgtg cgaccggccc ggttgctcct gtgagggcaa gggccacggc accgacgtgc
     6001 gcccactcaa cggcgcggac gccgctgacg gcgatgcggg caagcaggcc cgctacctct
     6061 acaaggacgg cgacaagacc aagggcggcg tcgccaagat cggcctggag ctggccggac
     6121 agaacttcaa ggccggtcgc ggcgacgacc gcatgggacc gctcgacctg ggcgacgcgg
     6181 cggccgccga gctgcagcgg cttcgtcggc ccggcccgtt cgtcgagaag taccgcgagc
     6241 gcgagttcgg cgtcttccag gtccgcaagc actaccggtc gcagaacctg aaccggctga
     6301 tcaaggaact cggcatccag caggacgtcc gcaccgagga ggagatcacc gacgacaccg
     6361 agggcctggt cgccatcgcg gtcatcccgg cctacatctg gtaccgatac atcgcccgcg
     6421 tcgccggacg tcgcctcgac ctcatcaagg tcgccgagac gtacggccta ccgggcgtcc
     6481 ggcggctcgt cgagtcctgg ggcctggtgt ggggcaagga cgtcctggac ccgcccgccc
     6541 cggaagcgcc ggccgcgccg ggcgaccttg acgctgacca gatgaggttc gaggtcatgt
     6601 ccgaggagga agctgctttc cgcgaggcgc gccggaaggc caacgaggcc cgcacggagg
     6661 agctggccgc ttcgctcgac cgagtgcgtc agccgaagaa ggaggcgatc cgcccgacga
     6721 tcagccttcg gaagcgcctg aagccgaagc cggtcaccgt cgacgtcaag actcccccgc
     6781 ccggcgccgc gtcgcccgtg tgccgccgct gcaagggcaa gctcgccccg gtactccagc
     6841 cctggggccg gctccccgga gactgcctcc gcgtcgacac agcggtcgcg tagggccgct
     6901 gagggaccgc catgagaccg ccaccccgga catccgggtg gcggtctcat ggcggtcccg
     6961 gcgcgaaagc cgagggtctg cctgccgtga ggtggccggc ggacctgggt tactgctgga
     7021 atcccgcgcc cagtccgagc gtccgccggc gcttttcacc tggctccggg tgctcgtcga
     7081 tgagcacca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2320/pSV40-Tkt-m小鼠基因质粒

P2321/pSV40-Fkbp4-m小鼠基因质粒

P2324/pSV40-Rnf126-m小鼠基因质粒

P2325/pSV40-Rpsa-m小鼠基因质粒

P2330/pSV40-Uchl1-m小鼠基因质粒

P2331/pSV40-Eif3j1-m小鼠基因质粒

P2332/pSV40-Sf3b2-m(1235-2634bp)小鼠基因质粒

P2378/pSV40-Tspan7-m小鼠基因质粒

P2379/pSV40-Morf4l2-m小鼠基因质粒

P2380/pSV40-Cpe-m小鼠基因质粒

P2381/pSV40-Mdm2-m小鼠基因质粒