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- Xybio
- 上海
- P0206
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pACT-MyoD
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pACT-MyoD哺乳双杂交质粒
别称: pACT-MyoD
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，哺乳细胞双杂交载体 |
| 质粒大小: | 7400bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
The CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid System provides positive control vectors that encode and express two proteins known to interact in vivo (13). MyoD is expressed in skeletal muscle and is a myogenic regulatory protein (14,15). The Id protein acts as a negative regulator of myogenic differentiation (16). MyoD and Id are members of the helix-loop-helix family of nuclear proteins. The pBIND-Id Control Vector contains a segment of murine Id cDNA (amino acids 29–148; 13,16) cloned in-frame with the GAL4 DNA-binding domain of the pBIND Vector . The pACT-MyoD Control Vector contains a segment of murine MyoD cDNA (amino acids 1–318; 13,15) cloned in-frame with the VP16 activation domain of the pACT Vector .
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3507/pENTR223-DNAJC27（23-822bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P3554/pENTR223-ANKRD50（1522-3753bp）人源基因质粒 |
| P3555/pENTR223-ZNF484（52-2610bp）人源基因质粒 |
| P3556/pENTR223-NSUN4（1点突变）人源基因质粒 |
| P3557/pENTR223-IL2RG人源基因质粒 |
| P3613/pENTR223-PCDHGC4人源基因质粒 |
| P3614/pENTR223-CCSER1人源基因质粒 |
| P3468/pUC19-BTBD7(1点突变1同义突变）人源基因质粒人源基因质粒 |
| P3270/pUC19-PAICS人源基因质粒 |
| P4381/pUC19-UHRF1（4同义突变）人源基因质粒 |
| P3271/pGEM-LAG3人源基因质粒 |
| P3508/pGEM-PABPCI人源基因质粒 |
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文献和实验1)，保存甘油菌(方法见 2.2)。将甘油菌扩增并保存到96 孔板(Corning Incorporated costar 3599)中，每 个孔对应一条小文库基因，-80℃冻存备用。 2) 将Y190 菌液(携带pGB-诱饵基因质粒)平铺在15cm 培养皿中, 用96 孔 第二章 酵母双杂交筛选 13 replicator(sigma)影印到15cm SD/-Trp 平板上。 将Y187 菌(携带pACT2-小文库基因质粒)用96 孔replicator 从96 孔板中
更易实施，有报道将双杂交筛出的基因片段插入一个带有抗原决定簇标记的质粒载体，该载体可在哺乳动物细胞中高水平表达被抗原决定簇所标记的蛋白质。用BD-X质粒和带有AD-Y插入的抗原决定簇质粒载体共转染哺乳动物细胞，即可直接进行免疫共沉淀检测。应用这一方法已证实了Bcl-XL和Bad/Bax之间的相互作用。7、哺乳动物细胞双杂交系统也发展起来。它是利用体内重建转录因子的原理，在基因水平上分析蛋白质-蛋白质相互作用，已成为酵母双杂交系统的辅助手段。该系统与酵母双杂交系统的区别在于报告基因与融合基因位于不同
一起时，可以启动RNA聚合酶II复合体的装配，启动下游报告基因的转录。通过检测下游报告基因产物的酶活性，可以验证蛋白之间的相互作用。 在哺乳动物双杂交系统中，一个质粒表达融合蛋白“X”，与DNA结合域Gal4蛋白融合；另一个质粒表达融合蛋白“Y”，与转录激活域VP16蛋白融合。当融合蛋白“X”与“Y”存在相互作用时，DNA结合域就与转录激活域就相互靠近，启动下游报告基因转录。哺乳细胞双杂交系统可在所选细胞系中研究蛋白相互作用，表达的蛋白质更好地保持了糖基化、磷酸化和酰基化等翻译后的修饰，处于
