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- Xybio
- 上海
- P0480
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pJTU1278
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pJTU1278链霉菌质粒
别称: pJTU1278
| 复制子: | pIJ101pBR322RP4T |
|---|---|
| 质粒分类: | 链霉素系列质粒 |
| 质粒大小: | 9237bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Tsr |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 链霉菌 |
| 培养条件: | 参考相关文献 |
质粒属性
| 载体宿主： | 广宿主 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pJTU1278质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2260/pSV40-Itm2b-m小鼠基因质粒 |
| P2261/pSV40-Mrpl38-m小鼠基因质粒 |
| P2262/pSV40-Rab6a-m小鼠基因质粒 |
| P2263/pSV40-Mdh1-m小鼠基因质粒 |
| P2264/pSV40-Sccpdh-m小鼠基因质粒 |
| P2265/pSV40-Haghl-m小鼠基因质粒 |
| P2266/pSV40-Fam19a1-m小鼠基因质粒 |
| P2267/pSV40-Fkbp4-m小鼠基因质粒 |
| P2268/pSV40-Gnas-m小鼠基因质粒 |
| P2269/pSV40-Nudt5-m小鼠基因质粒 |
| P2270/pSV40-Hacd3-m小鼠基因质粒 |
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文献和实验1、将适量的菌体悬浮于500μl溶菌酶溶液（2%）中，37℃温育1hr 左右至完全溶菌，2、加入500μl碱性SDS溶液（0.3mol/L NaOH, 2%SDS），立即振荡混合完全，3、打开管盖，在70℃放置15min（对大于20kb的质粒则最好放在55℃， 30min），然后于水浴中冷却至室温，4、加入100μl酸性苯酚/氯仿溶液，用混合器振荡至液体彻底混合均匀，12000rpm离心5min,移取上清液，弃去白色中间层。5、用中性苯酚/氯仿重复抽提直至看不见（或非常少）中间
原理 加利利链霉菌ATCC31671产生2-羟基阿克拉菌酮（2-hydroxyaklavinone）。将含有聚酮体酮基还原酶（polyketide ketoreductase，PKR）的质粒pWX03转入加利利链霉菌ATCC31671，可以产生阿克拉菌酮（aklavinone）。 第一部分 链霉菌质粒DNA提取 实验材料和试剂 菌种：质粒pWX03（含PKR）/变铅青链霉菌（S. lividans
1实验原理 DNA重组分子在体外构建完成后，必须导入特定的受体细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。对于不同的受体细胞，往往采取不同的转化战略。1.1 DNA重组分子的常用转化方法 1.1.1 Ca 2 诱导转化1970年Mandel和Higa发现用CaCl2处理过的大肠杆菌能够吸收l噬菌体DNA，此后不久，Cohen等人用此法实现了质粒DNA转化大肠杆菌的感受态细胞，其整个操作程序为：1）将处于对数生长期的细菌置入0℃
