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- 保质期：
2年
- 英文名：
pCEP4/CAT
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCEP4-CAT哺乳表达质粒
别称: pCEP4/CAT
质粒属性
质粒简介
pCEP4 is an episomal mammalian expression vector that uses thecytomegalovirus (CMV) immediate early enhancer/promoter for high level transcription of recombinant genes inserted into the multiple cloning site. The Epstein-Barr Virus replication origin (oriP) and nuclear antigen (encoded by the EBNA-1 gene) is carried by this plasmid to permit extrachromosomal replication in human, primate, and canine cells. pCEP4 also carries the hygromycin B resistance gene for stable selection in transfected cells.
pCEP4/CAT is provided as a positive control for the relative level of expression of recombinant proteins in a cell line of interest. It expresses the chloramphenicol acetyl transferase (CAT) protein from the CMV enhancer/promoter. Like its parent vector pCEP4, pCEP4/CAT contains the hygromycin B resistance gene for selection.
pCEP4是pCEP4/CAT的对照质粒，插入一个基因CAT.。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 10891 bp ds-DNA circular SYN 23-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCEP4-CAT
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 10891)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 23, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10891
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 4..383
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 384..587
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 675..1334
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CAT"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
polyA_signal 1377..1511
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin 2234..4023
/note="oriP"
/note="Epstein-Barr virus oriP replication origin (Yates et
al., 2000)"
promoter 6771..6875
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 6876..7736
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 7907..8495
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 8926..9071
/note="HSV TK promoter"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase promoter"
CDS 9114..10151
/codon_start=1
/product="hygromycin B phosphotransferase"
/note="HygR"
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPDRE
MGEAN"
polyA_signal 10193..10241
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
ORIGIN
1 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtccgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttac gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacaccaat gggcgtggat
421 agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt
481 tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa taaccccgcc ccgttgacgc
541 aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctcgt ttagtgaacc
601 gtcagatctc tagaagctgg gtaccagctg ctagcaagct tggctagcgg ccgccaggag
661 ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat
721 ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga
781 ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt
841 atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa ttccgtatgg
901 caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg atagtgttca cccttgttac accgttttcc
961 atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt
1021 ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc tatttcccta
1081 aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt
1141 ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat
1201 attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat catgccgtct
1261 gtgatggctt ccatgtcggc agaatgctta atgaattaca acagtactgc gatgagtggc
1321 agggcggggc gtaatttttt taaggcagtt attggtgccc ttggccggca aggccggatc
1381 cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa
1441 aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca
1501 ataaacaagt taacaacaac aattgcattc attttatgtt tcaggttcag ggggaggtgt
1561 gggaggtttt ttaaagcaag taaaacctct acaaatgtgg tatggctgat tatgatccgg
1621 ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac
1681 ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg cgtcagcggg
1741 tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgag gtcgactcta gaggatcgat gccccgcccc
1801 ggacgaacta aacctgacta cgacatctct gccccttctt cgcggggcag tgcatgtaat
1861 cccttcagtt ggttggtaca acttgccaac tgggccctgt tccacatgtg acacgggggg
1921 ggaccaaaca caaaggggtt ctctgactgt agttgacatc cttataaatg gatgtgcaca
1981 tttgccaaca ctgagtggct ttcatcctgg agcagacttt gcagtctgtg gactgcaaca
2041 caacattgcc tttatgtgta actcttggct gaagctctta caccaatgct gggggacatg
2101 tacctcccag gggcccagga agactacggg aggctacacc aacgtcaatc agaggggcct
2161 gtgtagctac cgataagcgg accctcaaga gggcattagc aatagtgttt ataaggcccc
2221 cttgttaacc ctaaacgggt agcatatgct tcccgggtag tagtatatac tatccagact
2281 aaccctaatt caatagcata tgttacccaa cgggaagcat atgctatcga attagggtta
2341 gtaaaagggt cctaaggaac agcgatatct cccaccccat gagctgtcac ggttttattt
2401 acatggggtc aggattccac gagggtagtg aaccatttta gtcacaaggg cagtggctga
2461 agatcaagga gcgggcagtg aactctcctg aatcttcgcc tgcttcttca ttctccttcg
2521 tttagctaat agaataactg ctgagttgtg aacagtaagg tgtatgtgag gtgctcgaaa
2581 acaaggtttc aggtgacgcc cccagaataa aatttggacg gggggttcag tggtggcatt
2641 gtgctatgac accaatataa ccctcacaaa ccccttgggc aataaatact agtgtaggaa
2701 tgaaacattc tgaatatctt taacaataga aatccatggg gtggggacaa gccgtaaaga
2761 ctggatgtcc atctcacacg aatttatggc tatgggcaac acataatcct agtgcaatat
2821 gatactgggg ttattaagat gtgtcccagg cagggaccaa gacaggtgaa ccatgttgtt
2881 acactctatt tgtaacaagg ggaaagagag tggacgccga cagcagcgga ctccactggt
2941 tgtctctaac acccccgaaa attaaacggg gctccacgcc aatggggccc ataaacaaag
3001 acaagtggcc actctttttt ttgaaattgt ggagtggggg cacgcgtcag cccccacacg
3061 ccgccctgcg gttttggact gtaaaataag ggtgtaataa cttggctgat tgtaaccccg
3121 ctaaccactg cggtcaaacc acttgcccac aaaaccacta atggcacccc ggggaatacc
3181 tgcataagta ggtgggcggg ccaagatagg ggcgcgattg ctgcgatctg gaggacaaat
3241 tacacacact tgcgcctgag cgccaagcac agggttgttg gtcctcatat tcacgaggtc
3301 gctgagagca cggtgggcta atgttgccat gggtagcata tactacccaa atatctggat
3361 agcatatgct atcctaatct atatctgggt agcataggct atcctaatct atatctgggt
3421 agcatatgct atcctaatct atatctgggt agtatatgct atcctaattt atatctgggt
3481 agcataggct atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt
3541 agtatatgct atcctaatct gtatccgggt agcatatgct atcctaatag agattagggt
3601 agtatatgct atcctaattt atatctgggt agcatatact acccaaatat ctggatagca
3661 tatgctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagca
3721 taggctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagta
3781 tatgctatcc taatttatat ctgggtagca taggctatcc taatctatat ctgggtagca
3841 tatgctatcc taatctatat ctgggtagta tatgctatcc taatctgtat ccgggtagca
3901 tatgctatcc tcatgcatat acagtcagca tatgataccc agtagtagag tgggagtgct
3961 atcctttgca tatgccgcca cctcccaagg gggcgtgaat tttcgctgct tgtccttttc
4021 ctgctggttg ctcccattct taggtgaatt taaggaggcc aggctaaagc cgtcgcatgt
4081 ctgattgctc accaggtaaa tgtcgctaat gttttccaac gcgagaaggt gttgagcgcg
4141 gagctgagtg acgtgacaac atgggtatgc ccaattgccc catgttggga ggacgaaaat
4201 ggtgacaaga cagatggcca gaaatacacc aacagcacgc atgatgtcta ctggggattt
4261 attctttagt gcgggggaat acacggcttt taatacgatt gagggcgtct cctaacaagt
4321 tacatcactc ctgcccttcc tcaccctcat ctccatcacc tccttcatct ccgtcatctc
4381 cgtcatcacc ctccgcggca gccccttcca ccataggtgg aaaccaggga ggcaaatcta
4441 ctccatcgtc aaagctgcac acagtcaccc tgatattgca ggtaggagcg ggctttgtca
4501 taacaaggtc cttaatcgca tccttcaaaa cctcagcaaa tatatgagtt tgtaaaaaga
4561 ccatgaaata acagacaatg gactccctta gcgggccagg ttgtgggccg ggtccagggg
4621 ccattccaaa ggggagacga ctcaatggtg taagacgaca ttgtggaata gcaagggcag
4681 ttcctcgcct taggttgtaa agggaggtct tactacctcc atatacgaac acaccggcga
4741 cccaagttcc ttcgtcggta gtcctttcta cgtgactcct agccaggaga gctcttaaac
4801 cttctgcaat gttctcaaat ttcgggttgg aacctccttg accacgatgc tttccaaacc
4861 accctccttt tttgcgcctg cctccatcac cctgaccccg gggtccagtg cttgggcctt
4921 ctcctgggtc atctgcgggg ccctgctcta tcgctcccgg gggcacgtca ggctcaccat
4981 ctgggccacc ttcttggtgg tattcaaaat aatcggcttc ccctacaggg tggaaaaatg
5041 gccttctacc tggagggggc ctgcgcggtg gagacccgga tgatgatgac tgactactgg
5101 gactcctggg cctcttttct ccacgtccac gacctctccc cctggctctt tcacgacttc
5161 cccccctggc tctttcacgt cctctacccc ggcggcctcc actacctcct cgaccccggc
5221 ctccactacc tcctcgaccc cggcctccac tgcctcctcg accccggcct ccacctcctg
5281 ctcctgcccc tcctgctcct gcccctcctc ctgctcctgc ccctcctgcc cctcctgctc
5341 ctgcccctcc tgcccctcct gctcctgccc ctcctgcccc tcctgctcct gcccctcctg
5401 cccctcctcc tgctcctgcc cctcctgccc ctcctcctgc tcctgcccct cctgcccctc
5461 ctgctcctgc ccctcctgcc cctcctgctc ctgcccctcc tgcccctcct gctcctgccc
5521 ctcctgctcc tgcccctcct gctcctgccc ctcctgctcc tgcccctcct gcccctcctg
5581 cccctcctcc tgctcctgcc cctcctgctc ctgcccctcc tgcccctcct gcccctcctg
5641 ctcctgcccc tcctcctgct cctgcccctc ctgcccctcc tgcccctcct cctgctcctg
5701 cccctcctgc ccctcctcct gctcctgccc ctcctcctgc tcctgcccct cctgcccctc
5761 ctgcccctcc tcctgctcct gcccctcctg cccctcctcc tgctcctgcc cctcctcctg
5821 ctcctgcccc tcctgcccct cctgcccctc ctcctgctcc tgcccctcct cctgctcctg
5881 cccctcctgc ccctcctgcc cctcctgccc ctcctcctgc tcctgcccct cctcctgctc
5941 ctgcccctcc tgctcctgcc cctcccgctc ctgctcctgc tcctgttcca ccgtgggtcc
6001 ctttgcagcc aatgcaactt ggacgttttt ggggtctccg gacaccatct ctatgtcttg
6061 gccctgatcc tgagccgccc ggggctcctg gtcttccgcc tcctcgtcct cgtcctcttc
6121 cccgtcctcg tccatggtta tcaccccctc ttctttgagg tccactgccg ccggagcctt
6181 ctggtccaga tgtgtctccc ttctctccta ggccatttcc aggtcctgta cctggcccct
6241 cgtcagacat gattcacact aaaagagatc aatagacatc tttattagac gacgctcagt
6301 gaatacaggg agtgcagact cctgccccct ccaacagccc ccccaccctc atccccttca
6361 tggtcgctgt cagacagatc caggtctgaa aattccccat cctccgaacc atcctcgtcc
6421 tcatcaccaa ttactcgcag cccggaaaac tcccgctgaa catcctcaag atttgcgtcc
6481 tgagcctcaa gccaggcctc aaattcctcg tccccctttt tgctggacgg tagggatggg
6541 gattctcggg acccctcctc ttcctcttca aggtcaccag acagagatgc tactggggca
6601 acggaagaaa agctgggtgc ggcctgtgag gatcagctta tcgatgataa gctgtcaaac
6661 atgagaattc ttgaagacga aagggcctcg tgatacgcct atttttatag gttaatgtca
6721 tgataataat ggtttcttag acgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc
6781 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct
6841 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg
6901 cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg
6961 tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc
7021 tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca
7081 cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtgt tgacgccggg caagagcaac
7141 tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa
7201 agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg
7261 ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt
7321 ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg
7381 aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgc agcaatggca acaacgttgc
7441 gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga
7501 tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta
7561 ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc
7621 cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg
7681 atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt
7741 cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa
7801 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt
7861 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt
7921 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt
7981 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga
8041 taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag
8101 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata
8161 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg
8221 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga
8281 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca
8341 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa
8401 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt
8461 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac
8521 ggttcctggc cttttgctgg ccttgaagct gtccctgatg gtcgtcatct acctgcctgg
8581 acagcatggc ctgcaacgcg ggcatcccga tgccgccgga agcgagaaga atcataatgg
8641 ggaaggccat ccagcctcgc gtcgcgaacg ccagcaagac gtagcccagc gcgtcggccc
8701 cgagatgcgc cgcgtgcggc tgctggagat ggcggacgcg atggatatgt tctgccaagg
8761 gttggtttgc gcattcacag ttctccgcaa gaattgattg gctccaattc ttggagtggt
8821 gaatccgtta gcgaggtgcc gccctgcttc atccccgtgg cccgttgctc gcgtttgctg
8881 gcggtgtccc cggaagaaat atatttgcat gtctttagtt ctatgatgac acaaaccccg
8941 cccagcgtct tgtcattggc gaattcgaac acgcagatgc agtcggggcg gcgcggtccg
9001 aggtccactt cgcatattaa ggtgacgcgt gtggcctcga acaccgagcg accctgcagc
9061 gacccgctta acagcgtcaa cagcgtgccg cagatcccgg ggggcaatga gatatgaaaa
9121 agcctgaact caccgcgacg tctgtcgaga agtttctgat cgaaaagttc gacagcgtct
9181 ccgacctgat gcagctctcg gagggcgaag aatctcgtgc tttcagcttc gatgtaggag
9241 ggcgtggata tgtcctgcgg gtaaatagct gcgccgatgg tttctacaaa gatcgttatg
9301 tttatcggca ctttgcatcg gccgcgctcc cgattccgga agtgcttgac attggggaat
9361 tcagcgagag cctgacctat tgcatctccc gccgtgcaca gggtgtcacg ttgcaagacc
9421 tgcctgaaac cgaactgccc gctgttctgc agccggtcgc ggaggccatg gatgcgatcg
9481 ctgcggccga tcttagccag acgagcgggt tcggcccatt cggaccgcaa ggaatcggtc
9541 aatacactac atggcgtgat ttcatatgcg cgattgctga tccccatgtg tatcactggc
9601 aaactgtgat ggacgacacc gtcagtgcgt ccgtcgcgca ggctctcgat gagctgatgc
9661 tttgggccga ggactgcccc gaagtccggc acctcgtgca cgcggatttc ggctccaaca
9721 atgtcctgac ggacaatggc cgcataacag cggtcattga ctggagcgag gcgatgttcg
9781 gggattccca atacgaggtc gccaacatct tcttctggag gccgtggttg gcttgtatgg
9841 agcagcagac gcgctacttc gagcggaggc atccggagct tgcaggatcg ccgcggctcc
9901 gggcgtatat gctccgcatt ggtcttgacc aactctatca gagcttggtt gacggcaatt
9961 tcgatgatgc agcttgggcg cagggtcgat gcgacgcaat cgtccgatcc ggagccggga
10021 ctgtcgggcg tacacaaatc gcccgcagaa gcgcggccgt ctggaccgat ggctgtgtag
10081 aagtactcgc cgatagtgga aaccgacgcc ccagcactcg tccggatcgg gagatggggg
10141 aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata
10201 aaaagacaga ataaaacgca cgggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc
10261 ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt
10321 ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa
10381 cgtcggggcg gcaggccctg ccatagccac tggccccgtg ggttagggac ggggtccccc
10441 atggggaatg gtttatggtt cgtgggggtt attattttgg gcgttgcgtg gggtcaggtc
10501 cacgactgga ctgagcagac agacccatgg tttttggatg gcctgggcat ggaccgcatg
10561 tactggcgcg acacgaacac cgggcgtctg tggctgccaa acacccccga cccccaaaaa
10621 ccaccgcgcg gatttctggc gtgccaagct agtcgaccaa ttctcatgtt tgacagctta
10681 tcatcgcaga tccgggcaac gttgttgcca ttgctgcagg cgcagaactg gtaggtatgg
10741 aagatctata cattgaatca atattggcaa ttagccatat tagtcattgg ttatatagca
10801 taaatcaata ttggctattg gccattgcat acgttgtatc tatatcataa tatgtacatt
10861 tatattggct catgtccaat atgaccgcca t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCEP4-CAT哺乳表达质粒
别称: pCEP4/CAT
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，蛋白过表达载体 |
| 质粒大小: | 10891bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCEP4 is an episomal mammalian expression vector that uses thecytomegalovirus (CMV) immediate early enhancer/promoter for high level transcription of recombinant genes inserted into the multiple cloning site. The Epstein-Barr Virus replication origin (oriP) and nuclear antigen (encoded by the EBNA-1 gene) is carried by this plasmid to permit extrachromosomal replication in human, primate, and canine cells. pCEP4 also carries the hygromycin B resistance gene for stable selection in transfected cells.
pCEP4/CAT is provided as a positive control for the relative level of expression of recombinant proteins in a cell line of interest. It expresses the chloramphenicol acetyl transferase (CAT) protein from the CMV enhancer/promoter. Like its parent vector pCEP4, pCEP4/CAT contains the hygromycin B resistance gene for selection.
pCEP4是pCEP4/CAT的对照质粒，插入一个基因CAT.。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 10891 bp ds-DNA circular SYN 23-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCEP4-CAT
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 10891)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 23, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10891
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 4..383
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 384..587
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 675..1334
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CAT"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
polyA_signal 1377..1511
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin 2234..4023
/note="oriP"
/note="Epstein-Barr virus oriP replication origin (Yates et
al., 2000)"
promoter 6771..6875
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 6876..7736
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 7907..8495
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 8926..9071
/note="HSV TK promoter"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase promoter"
CDS 9114..10151
/codon_start=1
/product="hygromycin B phosphotransferase"
/note="HygR"
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPDRE
MGEAN"
polyA_signal 10193..10241
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
ORIGIN
1 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata
61 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc
121 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag
181 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac
241 atcaagtgta tcatatgcca agtccgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg
301 cctggcatta tgcccagtac atgaccttac gggactttcc tacttggcag tacatctacg
361 tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacaccaat gggcgtggat
421 agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt
481 tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa taaccccgcc ccgttgacgc
541 aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctcgt ttagtgaacc
601 gtcagatctc tagaagctgg gtaccagctg ctagcaagct tggctagcgg ccgccaggag
661 ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat
721 ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga
781 ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt
841 atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa ttccgtatgg
901 caatgaaaga cggtgagctg gtgatatggg atagtgttca cccttgttac accgttttcc
961 atgagcaaac tgaaacgttt tcatcgctct ggagtgaata ccacgacgat ttccggcagt
1021 ttctacacat atattcgcaa gatgtggcgt gttacggtga aaacctggcc tatttcccta
1081 aagggtttat tgagaatatg tttttcgtct cagccaatcc ctgggtgagt ttcaccagtt
1141 ttgatttaaa cgtggccaat atggacaact tcttcgcccc cgttttcacc atgggcaaat
1201 attatacgca aggcgacaag gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat catgccgtct
1261 gtgatggctt ccatgtcggc agaatgctta atgaattaca acagtactgc gatgagtggc
1321 agggcggggc gtaatttttt taaggcagtt attggtgccc ttggccggca aggccggatc
1381 cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa
1441 aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca
1501 ataaacaagt taacaacaac aattgcattc attttatgtt tcaggttcag ggggaggtgt
1561 gggaggtttt ttaaagcaag taaaacctct acaaatgtgg tatggctgat tatgatccgg
1621 ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac
1681 ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg cgtcagcggg
1741 tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgag gtcgactcta gaggatcgat gccccgcccc
1801 ggacgaacta aacctgacta cgacatctct gccccttctt cgcggggcag tgcatgtaat
1861 cccttcagtt ggttggtaca acttgccaac tgggccctgt tccacatgtg acacgggggg
1921 ggaccaaaca caaaggggtt ctctgactgt agttgacatc cttataaatg gatgtgcaca
1981 tttgccaaca ctgagtggct ttcatcctgg agcagacttt gcagtctgtg gactgcaaca
2041 caacattgcc tttatgtgta actcttggct gaagctctta caccaatgct gggggacatg
2101 tacctcccag gggcccagga agactacggg aggctacacc aacgtcaatc agaggggcct
2161 gtgtagctac cgataagcgg accctcaaga gggcattagc aatagtgttt ataaggcccc
2221 cttgttaacc ctaaacgggt agcatatgct tcccgggtag tagtatatac tatccagact
2281 aaccctaatt caatagcata tgttacccaa cgggaagcat atgctatcga attagggtta
2341 gtaaaagggt cctaaggaac agcgatatct cccaccccat gagctgtcac ggttttattt
2401 acatggggtc aggattccac gagggtagtg aaccatttta gtcacaaggg cagtggctga
2461 agatcaagga gcgggcagtg aactctcctg aatcttcgcc tgcttcttca ttctccttcg
2521 tttagctaat agaataactg ctgagttgtg aacagtaagg tgtatgtgag gtgctcgaaa
2581 acaaggtttc aggtgacgcc cccagaataa aatttggacg gggggttcag tggtggcatt
2641 gtgctatgac accaatataa ccctcacaaa ccccttgggc aataaatact agtgtaggaa
2701 tgaaacattc tgaatatctt taacaataga aatccatggg gtggggacaa gccgtaaaga
2761 ctggatgtcc atctcacacg aatttatggc tatgggcaac acataatcct agtgcaatat
2821 gatactgggg ttattaagat gtgtcccagg cagggaccaa gacaggtgaa ccatgttgtt
2881 acactctatt tgtaacaagg ggaaagagag tggacgccga cagcagcgga ctccactggt
2941 tgtctctaac acccccgaaa attaaacggg gctccacgcc aatggggccc ataaacaaag
3001 acaagtggcc actctttttt ttgaaattgt ggagtggggg cacgcgtcag cccccacacg
3061 ccgccctgcg gttttggact gtaaaataag ggtgtaataa cttggctgat tgtaaccccg
3121 ctaaccactg cggtcaaacc acttgcccac aaaaccacta atggcacccc ggggaatacc
3181 tgcataagta ggtgggcggg ccaagatagg ggcgcgattg ctgcgatctg gaggacaaat
3241 tacacacact tgcgcctgag cgccaagcac agggttgttg gtcctcatat tcacgaggtc
3301 gctgagagca cggtgggcta atgttgccat gggtagcata tactacccaa atatctggat
3361 agcatatgct atcctaatct atatctgggt agcataggct atcctaatct atatctgggt
3421 agcatatgct atcctaatct atatctgggt agtatatgct atcctaattt atatctgggt
3481 agcataggct atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt
3541 agtatatgct atcctaatct gtatccgggt agcatatgct atcctaatag agattagggt
3601 agtatatgct atcctaattt atatctgggt agcatatact acccaaatat ctggatagca
3661 tatgctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagca
3721 taggctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagta
3781 tatgctatcc taatttatat ctgggtagca taggctatcc taatctatat ctgggtagca
3841 tatgctatcc taatctatat ctgggtagta tatgctatcc taatctgtat ccgggtagca
3901 tatgctatcc tcatgcatat acagtcagca tatgataccc agtagtagag tgggagtgct
3961 atcctttgca tatgccgcca cctcccaagg gggcgtgaat tttcgctgct tgtccttttc
4021 ctgctggttg ctcccattct taggtgaatt taaggaggcc aggctaaagc cgtcgcatgt
4081 ctgattgctc accaggtaaa tgtcgctaat gttttccaac gcgagaaggt gttgagcgcg
4141 gagctgagtg acgtgacaac atgggtatgc ccaattgccc catgttggga ggacgaaaat
4201 ggtgacaaga cagatggcca gaaatacacc aacagcacgc atgatgtcta ctggggattt
4261 attctttagt gcgggggaat acacggcttt taatacgatt gagggcgtct cctaacaagt
4321 tacatcactc ctgcccttcc tcaccctcat ctccatcacc tccttcatct ccgtcatctc
4381 cgtcatcacc ctccgcggca gccccttcca ccataggtgg aaaccaggga ggcaaatcta
4441 ctccatcgtc aaagctgcac acagtcaccc tgatattgca ggtaggagcg ggctttgtca
4501 taacaaggtc cttaatcgca tccttcaaaa cctcagcaaa tatatgagtt tgtaaaaaga
4561 ccatgaaata acagacaatg gactccctta gcgggccagg ttgtgggccg ggtccagggg
4621 ccattccaaa ggggagacga ctcaatggtg taagacgaca ttgtggaata gcaagggcag
4681 ttcctcgcct taggttgtaa agggaggtct tactacctcc atatacgaac acaccggcga
4741 cccaagttcc ttcgtcggta gtcctttcta cgtgactcct agccaggaga gctcttaaac
4801 cttctgcaat gttctcaaat ttcgggttgg aacctccttg accacgatgc tttccaaacc
4861 accctccttt tttgcgcctg cctccatcac cctgaccccg gggtccagtg cttgggcctt
4921 ctcctgggtc atctgcgggg ccctgctcta tcgctcccgg gggcacgtca ggctcaccat
4981 ctgggccacc ttcttggtgg tattcaaaat aatcggcttc ccctacaggg tggaaaaatg
5041 gccttctacc tggagggggc ctgcgcggtg gagacccgga tgatgatgac tgactactgg
5101 gactcctggg cctcttttct ccacgtccac gacctctccc cctggctctt tcacgacttc
5161 cccccctggc tctttcacgt cctctacccc ggcggcctcc actacctcct cgaccccggc
5221 ctccactacc tcctcgaccc cggcctccac tgcctcctcg accccggcct ccacctcctg
5281 ctcctgcccc tcctgctcct gcccctcctc ctgctcctgc ccctcctgcc cctcctgctc
5341 ctgcccctcc tgcccctcct gctcctgccc ctcctgcccc tcctgctcct gcccctcctg
5401 cccctcctcc tgctcctgcc cctcctgccc ctcctcctgc tcctgcccct cctgcccctc
5461 ctgctcctgc ccctcctgcc cctcctgctc ctgcccctcc tgcccctcct gctcctgccc
5521 ctcctgctcc tgcccctcct gctcctgccc ctcctgctcc tgcccctcct gcccctcctg
5581 cccctcctcc tgctcctgcc cctcctgctc ctgcccctcc tgcccctcct gcccctcctg
5641 ctcctgcccc tcctcctgct cctgcccctc ctgcccctcc tgcccctcct cctgctcctg
5701 cccctcctgc ccctcctcct gctcctgccc ctcctcctgc tcctgcccct cctgcccctc
5761 ctgcccctcc tcctgctcct gcccctcctg cccctcctcc tgctcctgcc cctcctcctg
5821 ctcctgcccc tcctgcccct cctgcccctc ctcctgctcc tgcccctcct cctgctcctg
5881 cccctcctgc ccctcctgcc cctcctgccc ctcctcctgc tcctgcccct cctcctgctc
5941 ctgcccctcc tgctcctgcc cctcccgctc ctgctcctgc tcctgttcca ccgtgggtcc
6001 ctttgcagcc aatgcaactt ggacgttttt ggggtctccg gacaccatct ctatgtcttg
6061 gccctgatcc tgagccgccc ggggctcctg gtcttccgcc tcctcgtcct cgtcctcttc
6121 cccgtcctcg tccatggtta tcaccccctc ttctttgagg tccactgccg ccggagcctt
6181 ctggtccaga tgtgtctccc ttctctccta ggccatttcc aggtcctgta cctggcccct
6241 cgtcagacat gattcacact aaaagagatc aatagacatc tttattagac gacgctcagt
6301 gaatacaggg agtgcagact cctgccccct ccaacagccc ccccaccctc atccccttca
6361 tggtcgctgt cagacagatc caggtctgaa aattccccat cctccgaacc atcctcgtcc
6421 tcatcaccaa ttactcgcag cccggaaaac tcccgctgaa catcctcaag atttgcgtcc
6481 tgagcctcaa gccaggcctc aaattcctcg tccccctttt tgctggacgg tagggatggg
6541 gattctcggg acccctcctc ttcctcttca aggtcaccag acagagatgc tactggggca
6601 acggaagaaa agctgggtgc ggcctgtgag gatcagctta tcgatgataa gctgtcaaac
6661 atgagaattc ttgaagacga aagggcctcg tgatacgcct atttttatag gttaatgtca
6721 tgataataat ggtttcttag acgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc
6781 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct
6841 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg
6901 cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg
6961 tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc
7021 tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca
7081 cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtgt tgacgccggg caagagcaac
7141 tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa
7201 agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg
7261 ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt
7321 ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg
7381 aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgc agcaatggca acaacgttgc
7441 gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga
7501 tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta
7561 ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc
7621 cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg
7681 atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt
7741 cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa
7801 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt
7861 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt
7921 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt
7981 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga
8041 taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag
8101 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata
8161 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg
8221 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga
8281 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca
8341 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa
8401 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt
8461 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac
8521 ggttcctggc cttttgctgg ccttgaagct gtccctgatg gtcgtcatct acctgcctgg
8581 acagcatggc ctgcaacgcg ggcatcccga tgccgccgga agcgagaaga atcataatgg
8641 ggaaggccat ccagcctcgc gtcgcgaacg ccagcaagac gtagcccagc gcgtcggccc
8701 cgagatgcgc cgcgtgcggc tgctggagat ggcggacgcg atggatatgt tctgccaagg
8761 gttggtttgc gcattcacag ttctccgcaa gaattgattg gctccaattc ttggagtggt
8821 gaatccgtta gcgaggtgcc gccctgcttc atccccgtgg cccgttgctc gcgtttgctg
8881 gcggtgtccc cggaagaaat atatttgcat gtctttagtt ctatgatgac acaaaccccg
8941 cccagcgtct tgtcattggc gaattcgaac acgcagatgc agtcggggcg gcgcggtccg
9001 aggtccactt cgcatattaa ggtgacgcgt gtggcctcga acaccgagcg accctgcagc
9061 gacccgctta acagcgtcaa cagcgtgccg cagatcccgg ggggcaatga gatatgaaaa
9121 agcctgaact caccgcgacg tctgtcgaga agtttctgat cgaaaagttc gacagcgtct
9181 ccgacctgat gcagctctcg gagggcgaag aatctcgtgc tttcagcttc gatgtaggag
9241 ggcgtggata tgtcctgcgg gtaaatagct gcgccgatgg tttctacaaa gatcgttatg
9301 tttatcggca ctttgcatcg gccgcgctcc cgattccgga agtgcttgac attggggaat
9361 tcagcgagag cctgacctat tgcatctccc gccgtgcaca gggtgtcacg ttgcaagacc
9421 tgcctgaaac cgaactgccc gctgttctgc agccggtcgc ggaggccatg gatgcgatcg
9481 ctgcggccga tcttagccag acgagcgggt tcggcccatt cggaccgcaa ggaatcggtc
9541 aatacactac atggcgtgat ttcatatgcg cgattgctga tccccatgtg tatcactggc
9601 aaactgtgat ggacgacacc gtcagtgcgt ccgtcgcgca ggctctcgat gagctgatgc
9661 tttgggccga ggactgcccc gaagtccggc acctcgtgca cgcggatttc ggctccaaca
9721 atgtcctgac ggacaatggc cgcataacag cggtcattga ctggagcgag gcgatgttcg
9781 gggattccca atacgaggtc gccaacatct tcttctggag gccgtggttg gcttgtatgg
9841 agcagcagac gcgctacttc gagcggaggc atccggagct tgcaggatcg ccgcggctcc
9901 gggcgtatat gctccgcatt ggtcttgacc aactctatca gagcttggtt gacggcaatt
9961 tcgatgatgc agcttgggcg cagggtcgat gcgacgcaat cgtccgatcc ggagccggga
10021 ctgtcgggcg tacacaaatc gcccgcagaa gcgcggccgt ctggaccgat ggctgtgtag
10081 aagtactcgc cgatagtgga aaccgacgcc ccagcactcg tccggatcgg gagatggggg
10141 aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata
10201 aaaagacaga ataaaacgca cgggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc
10261 ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt
10321 ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa
10381 cgtcggggcg gcaggccctg ccatagccac tggccccgtg ggttagggac ggggtccccc
10441 atggggaatg gtttatggtt cgtgggggtt attattttgg gcgttgcgtg gggtcaggtc
10501 cacgactgga ctgagcagac agacccatgg tttttggatg gcctgggcat ggaccgcatg
10561 tactggcgcg acacgaacac cgggcgtctg tggctgccaa acacccccga cccccaaaaa
10621 ccaccgcgcg gatttctggc gtgccaagct agtcgaccaa ttctcatgtt tgacagctta
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4660/pCMV-SPORT6-C4orf18人源基因质粒 |
| P4661/pCMV-SPORT6-SMAD2人源基因质粒 |
| P4662/pCMV-SPORT6-SAV1人源基因质粒 |
| P4663/pCMV-SPORT6-API5人源基因质粒 |
| P4664/pCMV-SPORT6-PBX3人源基因质粒 |
| P4665/pCMV-SPORT6-PFKFB4人源基因质粒 |
| P4666/pCMV-SPORT6-WDR41人源基因质粒 |
| P4667/pCMV-SPORT6-TAPBP（1点突变）人源基因质粒 |
| P4668/pCMV-SPORT6-ST3GAL4人源基因质粒 |
| P4669/pCMV-SPORT6-IMPDH2人源基因质粒 |
| P4670/pCMV-SPORT6-AK5人源基因质粒 |
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pCEP4-CAT哺乳表达质粒
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