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-20
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2年
- 英文名：
pSilent-1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSilent-1真菌干扰质粒
别称: pSilent-1
质粒属性
质粒简介
pSilent-1质粒是一种用于真菌RNAi基因沉默干扰的载体，其多克隆位点区域的酶切位点有XhoI,SnaBI,HindIII （MCS1）和BglII,SphI,StuI,KpnI,ApaI（MCS2）等。
质粒图谱
质粒序列
Gene silencing vector pSilent-1 DNA, complete sequence
GenBank: AB303070.2
FASTA Graphics
Go to:
LOCUS AB303070 7056 bp DNA circular SYN 11-DEC-2008
DEFINITION Gene silencing vector pSilent-1 DNA, complete sequence.
ACCESSION AB303070
VERSION AB303070.2 GI:217272796
KEYWORDS .
SOURCE Gene silencing vector pSilent-1
ORGANISM Gene silencing vector pSilent-1
other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE 1
AUTHORS Nakayashiki,H., Hanada,S., Nguyen,B.Q., Kadotani,N., Tosa,Y. and
Mayama,S.
TITLE RNA silencing as a tool for exploring gene function in ascomycete
fungi
JOURNAL Fungal Genet. Biol. 42 (4), 275-283 (2005)
PUBMED 15749047
REFERENCE 2 (bases 1 to 7056)
AUTHORS Nakayashiki,H.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (09-MAY-2007) Contact:Hitoshi Nakayashiki Kobe
University, Graduate school of agricultural science; 1 Rokko-dai
Nada, Kobe 657-8501, Japan
COMMENT On Dec 10, 2008 this sequence version replaced gi:146455412.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7056
/organism="Gene silencing vector pSilent-1"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:442632"
/note="Gene silencing vector for ascomysete fungi"
CDS 129..989
/note="unnamed protein product; Ampicillin resistance
gene"
/codon_start=1
/transl_table=11
/protein_id="BAF62257.1"
/db_xref="GI:146455413"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW"
regulatory 2226..2592
/regulatory_class="promoter"
/note="Aspergillus nidulans TrpC gene"
CDS 2593..3618
/note="unnamed protein product; Hygromycin resistance
gene"
/codon_start=1
/transl_table=11
/protein_id="BAF62258.1"
/db_xref="GI:146455414"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR
GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD
LPETELPAVLQPVAEAMD-AIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY
HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS
EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ
SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS
TRPRAKE"
regulatory 3638..4123
/regulatory_class="terminator"
/note="Aspergillus nidulans TrpC gene"
regulatory 4162..5447
/regulatory_class="promoter"
/note="Aspergillus nidulans TrpC gene"
misc_feature 5451..5476
/note="multi cloning site"
intron 5491..5624
/note="Magnaporthe grisea cutinase gene"
misc_feature 5637..5673
/note="multi cloning site"
regulatory 5675..6404
/regulatory_class="terminator"
/note="Aspergillus nidulans TrpC gene"
ORIGIN
1 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt
61 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa
121 ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt
181 gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt
241 tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt
301 ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg
361 tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga
421 atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa
481 gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga
541 caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa
601 ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca
661 ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta
721 ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac
781 ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc
841 gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag
901 ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga
961 taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt
1021 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata
1081 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag
1141 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa
1201 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt
1261 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc
1321 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa
1381 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa
1441 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc
1501 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa
1561 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa
1621 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg
1681 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc
1741 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg
1801 ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg
1861 agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg
1921 aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat
1981 gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg
2041 tgagttagct cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt
2101 tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg
2161 ccaagcgcgc aattaaccct cactaaaggg aacaaaagct ggagctccac cgcggtggcg
2221 gccgcgacgt taactgatat tgaaggagca ctttttgggc ttggctggag ctagtggagg
2281 tcaacaatga atgcctattt tggtttagtc gtccaggcgg tgagcacaaa atttgtgtcg
2341 tttgacaaga tggttcattt aggcaactgg tcagatcagc cccacttgta gcagtagcgg
2401 cggcgctcga agtgtgactc ttattagcag acaggaacga ggacattatt atcatctgct
2461 gcttggtgca cgataacttg gtgcgtttgt caagcaaggt aagtgaacga cccggtcata
2521 ccttcttaag ttcgcccttc ctccctttat ttcagattca atctgactta cctattctac
2581 ccaagcatcg atatgaaaaa gcctgaactc accgcgacgt ctgtcgagaa gtttctgatc
2641 gaaaagttcg acagcgtctc cgacctgatg cagctctcgg agggcgaaga atctcgtgct
2701 ttcagcttcg atgtaggagg gcgtggatat gtcctgcggg taaatagctg cgccgatggt
2761 ttctacaaag atcgttatgt ttatcggcac tttgcatcgg ccgcgctccc gattccggaa
2821 gtgcttgaca ttggggaatt cagcgagagc ctgacctatt gcatctcccg ccgtgcacag
2881 ggtgtcacgt tgcaagacct gcctgaaacc gaactgcccg ctgttctgca gccggtcgcg
2941 gaggccatgg atgcgatcgc tgcggccgat cttagccaga cgagcgggtt cggcccattc
3001 ggaccgcaag gaatcggtca atacactaca tggcgtgatt tcatatgcgc gattgctgat
3061 ccccatgtgt atcactggca aactgtgatg gacgacaccg tcagtgcgtc cgtcgcgcag
3121 gctctcgatg agctgatgct ttgggccgag gactgccccg aagtccggca cctcgtgcac
3181 gcggatttcg gctccaacaa tgtcctgacg gacaatggcc gcataacagc ggtcattgac
3241 tggagcgagg cgatgttcgg ggattcccaa tacgaggtcg ccaacatctt cttctggagg
3301 ccgtggttgg cttgtatgga gcagcagacg cgctacttcg agcggaggca tccggagctt
3361 gcaggatcgc cgcggctccg ggcgtatatg ctccgcattg gtcttgacca actctatcag
3421 agcttggttg acggcaattt cgatgatgca gcttgggcgc agggtcgatg cgacgcaatc
3481 gtccgatccg gagccgggac tgtcgggcgt acacaaatcg cccgcagaag cgcggccgtc
3541 tggaccgatg gctgtgtaga agtactcgcc gatagtggaa accgacgccc cagcactcgt
3601 ccgagggcaa aggaatagag tagatgccga ccggatcgat ccacttaacg ttactgaaat
3661 catcaaacag cttgacgaat ctggatataa gatcgttggt gtcgatgtca gctccggagt
3721 tgagacaaat ggtgttcagg atctcgataa gatacgttca tttgtccaag cagcaaagag
3781 tgccttctag tgatttaata gctccatgtc aacaagaata aaacgcgttt cgggtttacc
3841 tcttccagat acagctcatc tgcaatgcat taatgcattg gacctcgcaa ccctagtacg
3901 cccttcaggc tccggcgaag cagaagaata gcttagcaga gtctattttc attttcggga
3961 gacgagatca agcagatcaa cggtcgtcaa gagacctacg agactgagga atccgctctt
4021 ggctccacgc gactatatat ttgtctctaa ttgtactttg acatgctcct cttctttact
4081 ctgatagctt gactatgaaa attccgtcac cagcccctgg gttgcggccg ctctagaact
4141 agtggatccc ccgggctgca ggaattcatg ccagttgttc ccagtgatct tcgtttcgaa
4201 gatggacact cccaatttgt gcaagttatt cggcctacct ggctgtggcc gaggcgcgtt
4261 atcatgaccg tcgctgttca aagataaggc gagaagtttg cgggctgtct tgacgatatg
4321 gcttcgttca gacagatata gttcccggag tcgcaggcgt ctattcttct ccgaaacaaa
4381 ctcggctgca ctgtttccat caccgggtct ggcgttgagg atgtcagcga aactcggccc
4441 ggcaagtgac acccgaaaag tatcgactcc ggctgcccgt ttcaagctag tggcttcctc
4501 atcagcgagt cggccaagga gacgtgaagc aggacgggtt tgccattcca agaccgtgat
4561 ccgaagcgcg ttgatttcat caatcccagc cttttcgctc aaccaaagag catcggcttt
4621 gatttccttc aggtcatacg aggcttgtgc aatggtctcc gcatggatcg ctgctgttct
4681 cctatcaaac tcggattttg tcttagggga tggcgtagga aagacgctgc cgcggttcag
4741 aagcacctcg atgctatcag gatgtgacaa aaacgactcg aaaacccggg attcatcggt
4801 gatgctttcg ggatcgcaag cgtaaagaaa gactctcttc caagacctag aagtatagca
4861 aaatcagcag cagaccatca atgtatagcg aatgcgccca tacaaaagct gaacgtcccc
4921 ggagaagcac ttgtccaggg acgggaaata ggcttccgga acgggagcca ttggcagcac
4981 agctatatca ttctaagtaa acaaatgtaa tgagcaagcg gacggagtgc tgaaacctcc
5041 gtatgcctga agccgacgaa agcgcgttgg attagaggtc gacagaagat gatattgaag
5101 gagcactttt tgggcttggc tggagctagt ggaggtcaac aatgaatgcc tattttggtt
5161 tagtcgtcca ggcggtgagc acaaaatttg tgtcgtttga caagatggtt catttaggca
5221 actggtcaga tcagccccac ttgtagcagt agcggcggcg ctcgaagtgt gactcttatt
5281 agcagacagg aacgaggaca ttattatcat ctgctgcttg gtgcacgata acttggtgcg
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6841 tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga
6901 ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa
6961 gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac
7021 gcgaatttta acaaaatatt aacgcttaca atttag
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSilent-1真菌干扰质粒
别称: pSilent-1
| 启动子: | TrpC |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | TRPC |
| 质粒分类: | 丝状真菌载体；RNAi基因沉默干扰质粒 |
| 质粒大小: | 7056bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 丝状真菌 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSilent-1质粒是一种用于真菌RNAi基因沉默干扰的载体，其多克隆位点区域的酶切位点有XhoI,SnaBI,HindIII （MCS1）和BglII,SphI,StuI,KpnI,ApaI（MCS2）等。
质粒图谱
质粒序列
Gene silencing vector pSilent-1 DNA, complete sequence
GenBank: AB303070.2
FASTA Graphics
Go to:
LOCUS AB303070 7056 bp DNA circular SYN 11-DEC-2008
DEFINITION Gene silencing vector pSilent-1 DNA, complete sequence.
ACCESSION AB303070
VERSION AB303070.2 GI:217272796
KEYWORDS .
SOURCE Gene silencing vector pSilent-1
ORGANISM Gene silencing vector pSilent-1
other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE 1
AUTHORS Nakayashiki,H., Hanada,S., Nguyen,B.Q., Kadotani,N., Tosa,Y. and
Mayama,S.
TITLE RNA silencing as a tool for exploring gene function in ascomycete
fungi
JOURNAL Fungal Genet. Biol. 42 (4), 275-283 (2005)
PUBMED 15749047
REFERENCE 2 (bases 1 to 7056)
AUTHORS Nakayashiki,H.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (09-MAY-2007) Contact:Hitoshi Nakayashiki Kobe
University, Graduate school of agricultural science; 1 Rokko-dai
Nada, Kobe 657-8501, Japan
COMMENT On Dec 10, 2008 this sequence version replaced gi:146455412.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7056
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/mol_type="other DNA"
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CDS 129..989
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intron 5491..5624
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regulatory 5675..6404
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ORIGIN
1 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt
61 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa
121 ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt
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481 gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga
541 caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa
601 ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca
661 ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta
721 ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac
781 ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc
841 gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag
901 ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga
961 taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt
1021 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata
1081 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag
1141 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa
1201 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt
1261 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc
1321 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa
1381 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa
1441 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc
1501 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa
1561 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa
1621 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg
1681 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc
1741 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg
1801 ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg
1861 agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg
1921 aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat
1981 gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg
2041 tgagttagct cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt
2101 tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg
2161 ccaagcgcgc aattaaccct cactaaaggg aacaaaagct ggagctccac cgcggtggcg
2221 gccgcgacgt taactgatat tgaaggagca ctttttgggc ttggctggag ctagtggagg
2281 tcaacaatga atgcctattt tggtttagtc gtccaggcgg tgagcacaaa atttgtgtcg
2341 tttgacaaga tggttcattt aggcaactgg tcagatcagc cccacttgta gcagtagcgg
2401 cggcgctcga agtgtgactc ttattagcag acaggaacga ggacattatt atcatctgct
2461 gcttggtgca cgataacttg gtgcgtttgt caagcaaggt aagtgaacga cccggtcata
2521 ccttcttaag ttcgcccttc ctccctttat ttcagattca atctgactta cctattctac
2581 ccaagcatcg atatgaaaaa gcctgaactc accgcgacgt ctgtcgagaa gtttctgatc
2641 gaaaagttcg acagcgtctc cgacctgatg cagctctcgg agggcgaaga atctcgtgct
2701 ttcagcttcg atgtaggagg gcgtggatat gtcctgcggg taaatagctg cgccgatggt
2761 ttctacaaag atcgttatgt ttatcggcac tttgcatcgg ccgcgctccc gattccggaa
2821 gtgcttgaca ttggggaatt cagcgagagc ctgacctatt gcatctcccg ccgtgcacag
2881 ggtgtcacgt tgcaagacct gcctgaaacc gaactgcccg ctgttctgca gccggtcgcg
2941 gaggccatgg atgcgatcgc tgcggccgat cttagccaga cgagcgggtt cggcccattc
3001 ggaccgcaag gaatcggtca atacactaca tggcgtgatt tcatatgcgc gattgctgat
3061 ccccatgtgt atcactggca aactgtgatg gacgacaccg tcagtgcgtc cgtcgcgcag
3121 gctctcgatg agctgatgct ttgggccgag gactgccccg aagtccggca cctcgtgcac
3181 gcggatttcg gctccaacaa tgtcctgacg gacaatggcc gcataacagc ggtcattgac
3241 tggagcgagg cgatgttcgg ggattcccaa tacgaggtcg ccaacatctt cttctggagg
3301 ccgtggttgg cttgtatgga gcagcagacg cgctacttcg agcggaggca tccggagctt
3361 gcaggatcgc cgcggctccg ggcgtatatg ctccgcattg gtcttgacca actctatcag
3421 agcttggttg acggcaattt cgatgatgca gcttgggcgc agggtcgatg cgacgcaatc
3481 gtccgatccg gagccgggac tgtcgggcgt acacaaatcg cccgcagaag cgcggccgtc
3541 tggaccgatg gctgtgtaga agtactcgcc gatagtggaa accgacgccc cagcactcgt
3601 ccgagggcaa aggaatagag tagatgccga ccggatcgat ccacttaacg ttactgaaat
3661 catcaaacag cttgacgaat ctggatataa gatcgttggt gtcgatgtca gctccggagt
3721 tgagacaaat ggtgttcagg atctcgataa gatacgttca tttgtccaag cagcaaagag
3781 tgccttctag tgatttaata gctccatgtc aacaagaata aaacgcgttt cgggtttacc
3841 tcttccagat acagctcatc tgcaatgcat taatgcattg gacctcgcaa ccctagtacg
3901 cccttcaggc tccggcgaag cagaagaata gcttagcaga gtctattttc attttcggga
3961 gacgagatca agcagatcaa cggtcgtcaa gagacctacg agactgagga atccgctctt
4021 ggctccacgc gactatatat ttgtctctaa ttgtactttg acatgctcct cttctttact
4081 ctgatagctt gactatgaaa attccgtcac cagcccctgg gttgcggccg ctctagaact
4141 agtggatccc ccgggctgca ggaattcatg ccagttgttc ccagtgatct tcgtttcgaa
4201 gatggacact cccaatttgt gcaagttatt cggcctacct ggctgtggcc gaggcgcgtt
4261 atcatgaccg tcgctgttca aagataaggc gagaagtttg cgggctgtct tgacgatatg
4321 gcttcgttca gacagatata gttcccggag tcgcaggcgt ctattcttct ccgaaacaaa
4381 ctcggctgca ctgtttccat caccgggtct ggcgttgagg atgtcagcga aactcggccc
4441 ggcaagtgac acccgaaaag tatcgactcc ggctgcccgt ttcaagctag tggcttcctc
4501 atcagcgagt cggccaagga gacgtgaagc aggacgggtt tgccattcca agaccgtgat
4561 ccgaagcgcg ttgatttcat caatcccagc cttttcgctc aaccaaagag catcggcttt
4621 gatttccttc aggtcatacg aggcttgtgc aatggtctcc gcatggatcg ctgctgttct
4681 cctatcaaac tcggattttg tcttagggga tggcgtagga aagacgctgc cgcggttcag
4741 aagcacctcg atgctatcag gatgtgacaa aaacgactcg aaaacccggg attcatcggt
4801 gatgctttcg ggatcgcaag cgtaaagaaa gactctcttc caagacctag aagtatagca
4861 aaatcagcag cagaccatca atgtatagcg aatgcgccca tacaaaagct gaacgtcccc
4921 ggagaagcac ttgtccaggg acgggaaata ggcttccgga acgggagcca ttggcagcac
4981 agctatatca ttctaagtaa acaaatgtaa tgagcaagcg gacggagtgc tgaaacctcc
5041 gtatgcctga agccgacgaa agcgcgttgg attagaggtc gacagaagat gatattgaag
5101 gagcactttt tgggcttggc tggagctagt ggaggtcaac aatgaatgcc tattttggtt
5161 tagtcgtcca ggcggtgagc acaaaatttg tgtcgtttga caagatggtt catttaggca
5221 actggtcaga tcagccccac ttgtagcagt agcggcggcg ctcgaagtgt gactcttatt
5281 agcagacagg aacgaggaca ttattatcat ctgctgcttg gtgcacgata acttggtgcg
5341 tttgtcaagc aaggtaagtg aacgacccgg tcataccttc ttaagttcgc ccttcctccc
5401 tttatttcag attcaatctg acttacctat tctacccaag catcgatacc gtcgacctcg
5461 aggtacgtac aagcttgctg gaggatacag gtgagccttt cttcttgcct ctctttgttt
5521 tttttttgtt ctttttgccg aatagtgtac ccactggaga tttgttggcc atgcaaataa
5581 atggaaggga ctgacaagat tgtgaaattg ttcaaaacac acagccaggg aacggcagat
5641 cttcgcatgc taaggcctgt ggtacctggg ccccggatcc acttaacgtt actgaaatca
5701 tcaaacagct tgacgaatct ggatataaga tcgttggtgt cgatgtcagc tccggagttg
5761 agacaaatgg tgttcaggat ctcgataaga tacgttcatt tgtccaagca gcaaagagtg
5821 ccttctagtg atttaatagc tccatgtcaa caagaataaa acgcgtttcg ggtttacctc
5881 ttccagatac agctcatctg caatgcatta atgcattgga cctcgcaacc ctagtacgcc
5941 cttcaggctc cggcgaagca gaagaatagc ttagcagagt ctattttcat tttcgggaga
6001 cgagatcaag cagatcaacg gtcgtcaaga gacctacgag actgaggaat ccgctcttgg
6061 ctccacgcga ctatatattt gtctctaatt gtactttgac atgctcctct tctttactct
6121 gatagcttga ctatgaaaat tccgtcacca gcccctgggt tcgcaaagat aattgcatgt
6181 ttcttccttg aactctcaag cctacaggac acacattcat cgtaggtata aacctcgaaa
6241 tcattcctac taagatggta tacaatagta accatggttg cctagtgaat gctccgtaac
6301 acccaatacg ccggccgaaa cttttttaca actctcctat gagtcgttta cccagaatgc
6361 acaggtacac ttgtttagag gtaatccttc tttctagagg atcccaattc gccctatagt
6421 gagtcgtatt acgcgcgctc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct
6481 ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc
6541 gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatgggac
6601 gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct
6661 acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg
6721 ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt
6781 gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca
6841 tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga
6901 ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa
6961 gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac
7021 gcgaatttta acaaaatatt aacgcttaca atttag
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1125/pECMV-3×FLAG-SET人源基因质粒 |
| P1141/pCDNA3.1-AGK人源基因质粒 |
| P1142/pDsRed2-Dusp6人源基因质粒 |
| P1143/pDsRed2-FMR1人源基因质粒 |
| P1144/pEGFP-FXR2人源基因质粒 |
| P1153/pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒 |
| P4833/pECMV-3×FLAG-SDC1人源基因质粒 |
| P1154/pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1166/pECMV-3×FLAG-LGALS13人源基因质粒 |
| P1167/pECMV-3×FLAG-IL4人源基因质粒 |
| P1168/pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒 |
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