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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSilent-Dual1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSilent-Dual1真菌干扰质粒
别称: pSilent-Dual1
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5567 bp ds-DNA circular SYN 31-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pSilient-Dual1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5567)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, August 31, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5567
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/note="promoter for the E. coli lac operon"
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/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
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/note="CAP binding activates transcription in the presence
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related antibiotics"
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LIKHW"
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ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtaccgg
661 gccccccctc gaggacgtta actgatattg aaggagcact ttttgggctt ggctggagct
721 agtggaggtc aacaatgaat gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg agcacaaaat
781 ttgtgtcgtt tgacaagatg gttcatttag gcaactggtc agatcagccc cacttgtagc
841 agtagcggcg gcgctcgaag tgtgactctt attagcagac aggaacgagg acattattat
901 catctgctgc ttggtgcacg ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa gtgaacgacc
961 cggtcatacc ttcttaagtt cgcccttcct ccctttattt cagattcaat ctgacttacc
1021 tattctaccc aagcatcgat atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg
1081 cttgggtgga gaggctattc ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg
1141 ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt
1201 ccggtgccct gaatgaactg caggacgagg cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg
1261 gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac tggctgctat
1321 tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat
1381 ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc atacgcttga tccggctacc tgcccattcg
1441 accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg
1501 atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc
1561 tcaaggcgcg catgcccgac ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc
1621 cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg
1681 tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg
1741 gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca
1801 tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct tctgaggatc cacttaacgt tactgaaatc
1861 atcaaacagc ttgacgaatc tggatataag atcgttggtg tcgatgtcag ctccggagtt
1921 gagacaaatg gtgttcagga tctcgataag atacgttcat ttgtccaagc agcaaagagt
1981 gccttctagt gatttaatag ctccatgtca acaagaataa aacgcgtttc gggtttacct
2041 cttccagata cagctcatct gcaatgcatt aatgcattgg acctcgcaac cctagtacgc
2101 ccttcaggct ccggcgaagc agaagaatag cttagcagag tctattttca ttttcgggag
2161 acgagatcaa gcagatcaac ggtcgtcaag agacctacga gactgaggaa tccgctcttg
2221 gctccacgcg actatatatt tgtctctaat tgtactttga catgctcctc ttctttactc
2281 tgatagcttg actatgaaaa ttccgtcacc agccctgggt tctcgaggtc gacgacgtta
2341 actgagattg aaggagcact ttttgggctt ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat
2401 gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg
2461 gttcatttag gcaactggtc agatcagccc cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag
2521 tgtgactctt attagcagac aggaacgagg acattattat catctgctgc ttggtgcacg
2581 ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt
2641 cgcccttcct ccctttattt cagattcaat ctgacttacc tattctaccc aagcatcgat
2701 aagcttgata tcgaattcct gcagcccggg ggatccacta gttctagagc ggccgcaaat
2761 aaaggttctt ggatgggaag atgaatatac tgaagatggg aaaagaaaga gaaaagaaaa
2821 gagcagctgg tggggagagc aggaaaatat ggcaacaaat gttggactga cgcaacgacc
2881 ttgtcaaccc cgccgacaca ccgggcggac agacggggca aagctgccta ccagggactg
2941 agggacctca gcaggtcgag tgcagagcac cggatgggtc gactgccagc ttgtgttccc
3001 ggtctgcgcc gctggccagc tcctgagcgg cctttccggt ttcatacacc gggcaaagca
3061 ggagaggcac gatatttgga cgccctacag atgccggatg ggccaattag ggagcttacg
3121 cgccgggtac tcgctctacc tacttcggag aaggtactat ctcgtgaatc ttttaccaga
3181 tcggaagcaa ttggacttct gtacctaggt taatggcatg ctatttcgcc gacggctata
3241 cacccctggc ttcacattct ccttcgctta ctgccggtga ttcgatgaag ctccatattc
3301 tccgatgatg caatagattc ttggtcaacg aggggcacac cagcctttcc acttcggggc
3361 gagctccagc ttttgttccc tttagtgagg gttaattgcg cgcttggcgt aatcatggtc
3421 atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg
3481 aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt
3541 gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg
3601 ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga
3661 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
3721 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
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3841 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
3901 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
3961 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
4021 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
4081 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
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4201 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
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4381 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
4441 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
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4681 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
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5401 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
5461 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
5521 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSilent-Dual1真菌干扰质粒
别称: pSilent-Dual1
| 启动子: | gpdA,TrpC |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 丝状真菌载体；RNAi基因沉默干扰质粒 |
| 质粒大小: | 5567bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 丝状真菌 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5567 bp ds-DNA circular SYN 31-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pSilient-Dual1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5567)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, August 31, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
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FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5567
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
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protein_bind 3511..3532
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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LIKHW"
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ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
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1981 gccttctagt gatttaatag ctccatgtca acaagaataa aacgcgtttc gggtttacct
2041 cttccagata cagctcatct gcaatgcatt aatgcattgg acctcgcaac cctagtacgc
2101 ccttcaggct ccggcgaagc agaagaatag cttagcagag tctattttca ttttcgggag
2161 acgagatcaa gcagatcaac ggtcgtcaag agacctacga gactgaggaa tccgctcttg
2221 gctccacgcg actatatatt tgtctctaat tgtactttga catgctcctc ttctttactc
2281 tgatagcttg actatgaaaa ttccgtcacc agccctgggt tctcgaggtc gacgacgtta
2341 actgagattg aaggagcact ttttgggctt ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat
2401 gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg
2461 gttcatttag gcaactggtc agatcagccc cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag
2521 tgtgactctt attagcagac aggaacgagg acattattat catctgctgc ttggtgcacg
2581 ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt
2641 cgcccttcct ccctttattt cagattcaat ctgacttacc tattctaccc aagcatcgat
2701 aagcttgata tcgaattcct gcagcccggg ggatccacta gttctagagc ggccgcaaat
2761 aaaggttctt ggatgggaag atgaatatac tgaagatggg aaaagaaaga gaaaagaaaa
2821 gagcagctgg tggggagagc aggaaaatat ggcaacaaat gttggactga cgcaacgacc
2881 ttgtcaaccc cgccgacaca ccgggcggac agacggggca aagctgccta ccagggactg
2941 agggacctca gcaggtcgag tgcagagcac cggatgggtc gactgccagc ttgtgttccc
3001 ggtctgcgcc gctggccagc tcctgagcgg cctttccggt ttcatacacc gggcaaagca
3061 ggagaggcac gatatttgga cgccctacag atgccggatg ggccaattag ggagcttacg
3121 cgccgggtac tcgctctacc tacttcggag aaggtactat ctcgtgaatc ttttaccaga
3181 tcggaagcaa ttggacttct gtacctaggt taatggcatg ctatttcgcc gacggctata
3241 cacccctggc ttcacattct ccttcgctta ctgccggtga ttcgatgaag ctccatattc
3301 tccgatgatg caatagattc ttggtcaacg aggggcacac cagcctttcc acttcggggc
3361 gagctccagc ttttgttccc tttagtgagg gttaattgcg cgcttggcgt aatcatggtc
3421 atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg
3481 aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt
3541 gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg
3601 ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga
3661 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
3721 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
3781 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
3841 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
3901 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
3961 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
4021 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
4081 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
4141 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
4201 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
4261 gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
4321 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
4381 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
4441 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
4501 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
4561 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
4621 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
4681 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
4741 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
4801 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
4861 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
4921 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
4981 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
5041 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
5101 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
5161 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
5221 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
5281 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
5341 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
5401 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
5461 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
5521 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccac
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4933/pCDNA3.0-HA-KPNA1人源基因质粒 |
| P4941/pCDNA3.1-PINK1-Myc人源基因质粒 |
| P4942/pECMV-3×FLAG-METTL14人源基因质粒 |
| P4961/pLVML-Myc-KBTBD6-IRES-Puro人源基因质粒 |
| P4955/pCMV-HA-MICALL2(2同义突变）人源基因质粒 |
| P4956/pECMV-3×FLAG-METTL3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P1169/pECMV-3×FLAG-H-FABP人源基因质粒 |
| P1170/pECMV-3×FLAG-TRAF6-S12F人源基因质粒 |
| P1171/pECMV-3×FLAG-GSK3B人源基因质粒 |
| P1172/pECMV-3×FLAG-CD1D人源基因质粒 |
| P1719/pECMV-3×FLAG-CD4人源基因质粒 |
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