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- 详细信息
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBARGPE1-EGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBARGPE1-EGFP真菌表达质粒
别称: pBARGPE1-EGFP
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6226 bp ds-DNA circular SYN 30-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBARGPE1-EGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6226)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6226
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS complement(55..774)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
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GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
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/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
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/note="gpdA Promoter"
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/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
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/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
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/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
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/gene="S. cerevisiae TRP1"
/note="TRP1 promoter"
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/note="TrpC Promotor"
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/gene="Streptomyces hygroscopicus bar"
/product="phosphinothricin acetyltransferase"
/note="Bar"
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/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
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/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
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/note="trpC terminator"
ORIGIN
1 ggtaccgggc cccccctcga ggtcgacggt atcgataagc ttgatatcga attcttactt
61 gtacagctcg tccatgccga gagtgatccc ggcggcggtc acgaactcca gcaggaccat
121 gtgatcgcgc ttctcgttgg ggtctttgct cagggcggac tgggtgctca ggtagtggtt
181 gtcgggcagc agcacggggc cgtcgccgat gggggtgttc tgctggtagt ggtcggcgag
241 ctgcacgctg ccgtcctcga tgttgtggcg gatcttgaag ttcaccttga tgccgttctt
301 ctgcttgtcg gccatgatat agacgttgtg gctgttgtag ttgtactcca gcttgtgccc
361 caggatgttg ccgtcctcct tgaagtcgat gcccttcagc tcgatgcggt tcaccagggt
421 gtcgccctcg aacttcacct cggcgcgggt cttgtagttg ccgtcgtcct tgaagaagat
481 ggtgcgctcc tggacgtagc cttcgggcat ggcggacttg aagaagtcgt gctgcttcat
541 gtggtcgggg tagcggctga agcactgcac gccgtaggtc agggtggtca cgagggtggg
601 ccagggcacg ggcagcttgc cggtggtgca gatgaacttc agggtcagct tgccgtaggt
661 ggcatcgccc tcgccctcgc cggacacgct gaacttgtgg ccgtttacgt cgccgtccag
721 ctcgaccagg atgggcacca ccccggtgaa cagctcctcg cccttgctca ccatggatcc
781 tctagagtcg aggtcgacgg tatcgataag cttgattaaa ggttcttgga tgggaagatg
841 aatatactga agatgggaaa agaaagagaa aagaaaagag cagctggtgg ggagagcagg
901 aaaatatggc aacaaatgtt ggactgacgc aacgaccttg tcaaccccgc cgacacaccg
961 ggcggacaga cggggcaaag ctgcctacca gggactgagg gacctcagca ggtcgagtgc
1021 agagcaccgg atgggtcgac tgccagcttg tgttcccggt ctgcgccgct ggccagctcc
1081 tgagcggcct ttccggtttc atacaccggg caaagcagga gaggcacgat atttggacgc
1141 cctacagatg ccggatgggc caattaggga gcttacgcgc cgggtactcg ctctacctac
1201 ttcggagaag gtactatctc gtgaatcttt taccagatcg gaagcaattg gacttctgta
1261 cctaggttaa tggcatgcta tttcgccgac ggctatacac ccctggcttc acattctcct
1321 tcgcttactg ccggtgattc gatgaagctc catattctcc gatgatgcaa tagattcttg
1381 gtcaacgagg ggcacaccag cctttccact tcggggcgga ggggcggccg gtcccggatt
1441 aataatcatc cactgcacct cagagccgcc agagctgtct ggcgcagtgg cgcttattac
1501 tcagcccttc tctctgcgtc cgtccgtctc tccgcatgct ttgcatactt ctgcctgctg
1561 gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagagat ctctgcctcg
1621 cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag
1681 cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg
1741 gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct
1801 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
1861 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga
1921 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
1981 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
2041 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
2101 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
2161 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
2221 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
2281 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
2341 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
2401 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
2461 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
2521 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
2581 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
2641 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
2701 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
2761 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
2821 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
2881 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
2941 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
3001 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
3061 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
3121 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
3181 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
3241 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
3301 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
3361 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
3421 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
3481 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
3541 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
3601 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
3661 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
3721 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
3781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga
3841 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct
3901 tcaagaatta attcggtcga aaaaagaaaa ggagagggcc aagagggagg gcattggtga
3961 ctattgagca cgtgagtata cgtgattaag cacacaaagg cagcttggag tatgtctgtt
4021 attaatttca caggtagttc tggtccattg gtgaaagttt gcggcttgca gagcacagag
4081 gccgcagaat gtgctctaga ctcgacagaa gatgatattg aaggagcact ttttgggctt
4141 ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg
4201 agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg gttcatttag gcaactggtc agatcagccc
4261 cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag tgtgactctt attagcagac aggaacgagg
4321 acattattat catctgctgc ttggtgcacg ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa
4381 gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt cgcccttcct ccctttattt cagattcaat
4441 ctgacttacc tattctaccc aagcaaagct tcgattagga agtaaccatg agcccagaac
4501 gacgcccggc cgacatccgc cgtgccaccg aggcggacat gccggcggtc tgcaccatcg
4561 tcaaccacta catcgagaca agcacggtca acttccgtac cgagccgcag gaaccgcagg
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5401 aacaaccgcc gcggccggtc gagggaccta ataacttcgt atagcataca ttatacgaag
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5521 gtaaactcct cttcagacct aataacttcg tatagcatac attatacgaa gttatattaa
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5641 gttgtcctgg ccacggcaga agcacgctta tcgctccaat ttcccacaac attagtcaac
5701 tccgttaggc ccttcattga aagaaatgag gtcatcaaat gtcttccaat gtgagatttt
5761 gggccatttt ttatagcaaa gattgaataa ggcgcatttt tcttcaaagc ttgcaaatta
5821 aagccttcga gcgtcccaaa accttctcaa gcaaggtttt cagtataatg ttacatgcgt
5881 acacgcgcta tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca
5941 taaaaaccca tctcataaat aacgtcatgc attgcagatg agctgtatct ggaagaggta
6001 aacccgaaac gcgttttatt cttgttgaca tggagctatt aaatcactag aaggcactct
6061 ttgctgcttg gacaaatgaa cgtatcttat cgagatcctg aacaccattt gtctcaactc
6121 cggagctgac atcgacacca acgatcttat atccagattc gtcaagctgt ttgatgattt
6181 cagtaacgtt aagtggatct cggtgacggg caggaccgga cggggc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBARGPE1-EGFP真菌表达质粒
别称: pBARGPE1-EGFP
| 启动子: | gpdA |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | trpC |
| 质粒分类: | 其他宿主穿梭载体；丝状真菌表达质粒 |
| 质粒大小: | 6226bp |
| 质粒标签: | 增强型绿色荧光蛋白EGFP |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Bar |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 丝状真菌 |
| 培养条件: | 根据文献操作 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | 根据全序列设计 |
| 3'测序引物: | 根据全序列设计 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Bar |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6226 bp ds-DNA circular SYN 30-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBARGPE1-EGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6226)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6226
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS complement(55..774)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
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GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
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primer_bind 789..805
/note="KS primer"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
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/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
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/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2839..3699)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
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related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3700..3804)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 3910..4011
/gene="S. cerevisiae TRP1"
/note="TRP1 promoter"
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CDS 4488..5039
/codon_start=1
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TLYTHLLKSLEAQGFKSVVAVIGLPNDPSVRMHEALGYAPRGMLRAAGFKHGNWHDVGF
WQLDFSLPVPPRPVLPVTEI"
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/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
protein_bind 5542..5575
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/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
misc_feature 5969..6199
/note="trpC terminator"
ORIGIN
1 ggtaccgggc cccccctcga ggtcgacggt atcgataagc ttgatatcga attcttactt
61 gtacagctcg tccatgccga gagtgatccc ggcggcggtc acgaactcca gcaggaccat
121 gtgatcgcgc ttctcgttgg ggtctttgct cagggcggac tgggtgctca ggtagtggtt
181 gtcgggcagc agcacggggc cgtcgccgat gggggtgttc tgctggtagt ggtcggcgag
241 ctgcacgctg ccgtcctcga tgttgtggcg gatcttgaag ttcaccttga tgccgttctt
301 ctgcttgtcg gccatgatat agacgttgtg gctgttgtag ttgtactcca gcttgtgccc
361 caggatgttg ccgtcctcct tgaagtcgat gcccttcagc tcgatgcggt tcaccagggt
421 gtcgccctcg aacttcacct cggcgcgggt cttgtagttg ccgtcgtcct tgaagaagat
481 ggtgcgctcc tggacgtagc cttcgggcat ggcggacttg aagaagtcgt gctgcttcat
541 gtggtcgggg tagcggctga agcactgcac gccgtaggtc agggtggtca cgagggtggg
601 ccagggcacg ggcagcttgc cggtggtgca gatgaacttc agggtcagct tgccgtaggt
661 ggcatcgccc tcgccctcgc cggacacgct gaacttgtgg ccgtttacgt cgccgtccag
721 ctcgaccagg atgggcacca ccccggtgaa cagctcctcg cccttgctca ccatggatcc
781 tctagagtcg aggtcgacgg tatcgataag cttgattaaa ggttcttgga tgggaagatg
841 aatatactga agatgggaaa agaaagagaa aagaaaagag cagctggtgg ggagagcagg
901 aaaatatggc aacaaatgtt ggactgacgc aacgaccttg tcaaccccgc cgacacaccg
961 ggcggacaga cggggcaaag ctgcctacca gggactgagg gacctcagca ggtcgagtgc
1021 agagcaccgg atgggtcgac tgccagcttg tgttcccggt ctgcgccgct ggccagctcc
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1141 cctacagatg ccggatgggc caattaggga gcttacgcgc cgggtactcg ctctacctac
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1321 tcgcttactg ccggtgattc gatgaagctc catattctcc gatgatgcaa tagattcttg
1381 gtcaacgagg ggcacaccag cctttccact tcggggcgga ggggcggccg gtcccggatt
1441 aataatcatc cactgcacct cagagccgcc agagctgtct ggcgcagtgg cgcttattac
1501 tcagcccttc tctctgcgtc cgtccgtctc tccgcatgct ttgcatactt ctgcctgctg
1561 gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagagat ctctgcctcg
1621 cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag
1681 cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg
1741 gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct
1801 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
1861 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga
1921 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
1981 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
2041 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
2101 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
2161 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
2221 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
2281 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
2341 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
2401 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
2461 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
2521 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
2581 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
2641 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
2701 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
2761 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
2821 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
2881 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
2941 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
3001 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
3061 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
3121 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
3181 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
3241 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
3301 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
3361 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
3421 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
3481 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
3541 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
3601 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
3661 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
3721 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
3781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga
3841 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct
3901 tcaagaatta attcggtcga aaaaagaaaa ggagagggcc aagagggagg gcattggtga
3961 ctattgagca cgtgagtata cgtgattaag cacacaaagg cagcttggag tatgtctgtt
4021 attaatttca caggtagttc tggtccattg gtgaaagttt gcggcttgca gagcacagag
4081 gccgcagaat gtgctctaga ctcgacagaa gatgatattg aaggagcact ttttgggctt
4141 ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg
4201 agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg gttcatttag gcaactggtc agatcagccc
4261 cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag tgtgactctt attagcagac aggaacgagg
4321 acattattat catctgctgc ttggtgcacg ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa
4381 gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt cgcccttcct ccctttattt cagattcaat
4441 ctgacttacc tattctaccc aagcaaagct tcgattagga agtaaccatg agcccagaac
4501 gacgcccggc cgacatccgc cgtgccaccg aggcggacat gccggcggtc tgcaccatcg
4561 tcaaccacta catcgagaca agcacggtca acttccgtac cgagccgcag gaaccgcagg
4621 agtggacgga cgacctcgtc cgtctgcggg agcgctatcc ctggctcgtc gccgaggtgg
4681 acggcgaggt cgccggcatc gcctacgcgg gcccctggaa ggcacgcaac gcctacgact
4741 ggacggccga gtcgaccgtg tacgtctccc cccgccacca gcggacggga ctgggctcca
4801 cgctctacac ccacctgctg aagtccctgg aggcacaggg cttcaagagc gtggtcgctg
4861 tcatcgggct gcccaacgac ccgagcgtgc gcatgcacga ggcgctcgga tatgcccccc
4921 gcggcatgct gcgggcggcc ggcttcaagc acgggaactg gcatgacgtg ggtttctggc
4981 agctggactt cagcctgccg gtaccgcccc gtccggtcct gcccgtcacc gagatctgat
5041 ccgtcgacct gcagatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt
5101 tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat
5161 taacatgtaa tgcatagtac cgagaaacta gtggatctaa acataaaatc tgtaaaataa
5221 caagatgtaa agataatgct aaatcatttg gctttttgat tgattgtaca ggaaaatata
5281 catcgcaggg ggttgacttt taccatttca ccgcaatgga atcaaacttg ttgaagagaa
5341 tgttcacagg cgcatacgct acaatgaccc gattcttgct agccttttct cggtcttgca
5401 aacaaccgcc gcggccggtc gagggaccta ataacttcgt atagcataca ttatacgaag
5461 ttatattaag ggttccggat cgcggccgct cgacctgcag ccaagctagc ttggctggac
5521 gtaaactcct cttcagacct aataacttcg tatagcatac attatacgaa gttatattaa
5581 gggttattga atatgatcgg aattggtcga tcaggtattg ctgttatctg atgagtatac
5641 gttgtcctgg ccacggcaga agcacgctta tcgctccaat ttcccacaac attagtcaac
5701 tccgttaggc ccttcattga aagaaatgag gtcatcaaat gtcttccaat gtgagatttt
5761 gggccatttt ttatagcaaa gattgaataa ggcgcatttt tcttcaaagc ttgcaaatta
5821 aagccttcga gcgtcccaaa accttctcaa gcaaggtttt cagtataatg ttacatgcgt
5881 acacgcgcta tattttgttt tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca
5941 taaaaaccca tctcataaat aacgtcatgc attgcagatg agctgtatct ggaagaggta
6001 aacccgaaac gcgttttatt cttgttgaca tggagctatt aaatcactag aaggcactct
6061 ttgctgcttg gacaaatgaa cgtatcttat cgagatcctg aacaccattt gtctcaactc
6121 cggagctgac atcgacacca acgatcttat atccagattc gtcaagctgt ttgatgattt
6181 cagtaacgtt aagtggatct cggtgacggg caggaccgga cggggc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0895/pET28a-hpKM1人源基因质粒 |
| P0643/pET28a-SUMO-TRFH人源基因质粒 |
| P0644/pGEX-6p-1-tankyrase人源基因质粒 |
| P0535/pET28a-Ngal人源基因质粒 |
| P0688/pGEX-STAT3人源基因质粒 |
| P0537/pET28a-TGFB1人源基因质粒 |
| P1054/pT7-His-AGK人源基因质粒 |
| P1055/pT7-His-TNF人源基因质粒 |
| P1140/pT7-His-IL13人源基因质粒 |
| P1160/pT7-His-LGALS13人源基因质粒 |
| P1161/pT7-His-IL4人源基因质粒 |
| P1162/pT7-His-IL6人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂，它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物，是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。 三、实验材料与器材 1、材料 293T细胞 MyoD表达质粒和EGFP表达质粒 DMEM培养基 链霉素/青霉素（双抗） FCS（小牛血清） PBS（磷酸盐缓冲溶液） 胰酶/EDTA消化液 转染试剂（TransFast2、器材 20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头 酒精
我的意思，谢谢 shylook 测序能解决你insert位置的问题 而且也是必须的 慢病毒质粒问题 你应该google下 普通质粒的话 带荧光的话 有pEGFP pIRES2-EGFP这样的融合和非融合的过表达质粒 考虑你的需要选择什么质粒 angel_851209 我这有pEGFP-N1的序列 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯
pBARGPE1-EGFP真菌表达质粒
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