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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBARGPE1-Hygro-EGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBARGPE1-Hygro-EGFP真菌表达质粒
别称: pBARGPE1-Hygro-EGFP
质粒属性
质粒简介
pBARGPE1-Hygro-EGFP是一个大肠杆菌-丝状真菌穿梭绿色荧光表达质粒，转化至大肠杆菌可用氨苄抗生素（终浓度100ug/ml）筛选，转化至丝状真菌中可用潮霉素Hygromycin（具体浓度请先做预实验测试或者参考相关文献）筛选，在真菌中可利用gpdA promoter启动绿色荧光蛋白EGFP的表达。因为本质粒的EGFP携带有终止密码子，所以不方便再克隆外源目的基因进入.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6700 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pBARGPE1-Hygro-EGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6700)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6700
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(55..774)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
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/note="gpdA Promoter"
misc_feature 1754..1894
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(2080..2668)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2839..3699)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
promoter complement(3700..3804)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
misc_feature 4102..4487
/note="TrpC Promotor"
CDS 4488..5513
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/note="HygR"
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
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K"
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/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
protein_bind 6016..6049
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="loxP"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
misc_feature 6442..6673
/note="trpC terminator"
ORIGIN
1 ggtaccgggc cccccctcga ggtcgacggt atcgataagc ttgatatcga attcttactt
61 gtacagctcg tccatgccga gagtgatccc ggcggcggtc acgaactcca gcaggaccat
121 gtgatcgcgc ttctcgttgg ggtctttgct cagggcggac tgggtgctca ggtagtggtt
181 gtcgggcagc agcacggggc cgtcgccgat gggggtgttc tgctggtagt ggtcggcgag
241 ctgcacgctg ccgtcctcga tgttgtggcg gatcttgaag ttcaccttga tgccgttctt
301 ctgcttgtcg gccatgatat agacgttgtg gctgttgtag ttgtactcca gcttgtgccc
361 caggatgttg ccgtcctcct tgaagtcgat gcccttcagc tcgatgcggt tcaccagggt
421 gtcgccctcg aacttcacct cggcgcgggt cttgtagttg ccgtcgtcct tgaagaagat
481 ggtgcgctcc tggacgtagc cttcgggcat ggcggacttg aagaagtcgt gctgcttcat
541 gtggtcgggg tagcggctga agcactgcac gccgtaggtc agggtggtca cgagggtggg
601 ccagggcacg ggcagcttgc cggtggtgca gatgaacttc agggtcagct tgccgtaggt
661 ggcatcgccc tcgccctcgc cggacacgct gaacttgtgg ccgtttacgt cgccgtccag
721 ctcgaccagg atgggcacca ccccggtgaa cagctcctcg cccttgctca ccatggatcc
781 tctagagtcg aggtcgacgg tatcgataag cttgattaaa ggttcttgga tgggaagatg
841 aatatactga agatgggaaa agaaagagaa aagaaaagag cagctggtgg ggagagcagg
901 aaaatatggc aacaaatgtt ggactgacgc aacgaccttg tcaaccccgc cgacacaccg
961 ggcggacaga cggggcaaag ctgcctacca gggactgagg gacctcagca ggtcgagtgc
1021 agagcaccgg atgggtcgac tgccagcttg tgttcccggt ctgcgccgct ggccagctcc
1081 tgagcggcct ttccggtttc atacaccggg caaagcagga gaggcacgat atttggacgc
1141 cctacagatg ccggatgggc caattaggga gcttacgcgc cgggtactcg ctctacctac
1201 ttcggagaag gtactatctc gtgaatcttt taccagatcg gaagcaattg gacttctgta
1261 cctaggttaa tggcatgcta tttcgccgac ggctatacac ccctggcttc acattctcct
1321 tcgcttactg ccggtgattc gatgaagctc catattctcc gatgatgcaa tagattcttg
1381 gtcaacgagg ggcacaccag cctttccact tcggggcgga ggggcggccg gtcccggatt
1441 aataatcatc cactgcacct cagagccgcc agagctgtct ggcgcagtgg cgcttattac
1501 tcagcccttc tctctgcgtc cgtccgtctc tccgcatgct ttgcatactt ctgcctgctg
1561 gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagagat ctctgcctcg
1621 cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag
1681 cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg
1741 gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct
1801 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
1861 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga
1921 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
1981 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
2041 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
2101 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
2161 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
2221 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
2281 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
2341 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
2401 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
2461 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
2521 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
2581 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
2641 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
2701 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
2761 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
2821 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
2881 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
2941 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
3001 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
3061 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
3121 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
3181 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
3241 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
3301 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
3361 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
3421 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
3481 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
3541 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
3601 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
3661 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
3721 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
3781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga
3841 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct
3901 tcaagaatta attcggtcga aaaaagaaaa ggagagggcc aagagggagg gcattggtga
3961 ctattgagca cgtgagtata cgtgattaag cacacaaagg cagcttggag tatgtctgtt
4021 attaatttca caggtagttc tggtccattg gtgaaagttt gcggcttgca gagcacagag
4081 gccgcagaat gtgctctaga ctcgacagaa gatgatattg aaggagcact ttttgggctt
4141 ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg
4201 agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg gttcatttag gcaactggtc agatcagccc
4261 cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag tgtgactctt attagcagac aggaacgagg
4321 acattattat catctgctgc ttggtgcacg ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa
4381 gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt cgcccttcct ccctttattt cagattcaat
4441 ctgacttacc tattctaccc aagcaaagct tcgattagga agtaaccatg aaaaagcctg
4501 aactcaccgc gacgtctgtc gagaagtttc tgatcgaaaa gttcgacagc gtctccgacc
4561 tgatgcagct ctcggagggc gaagaatctc gtgctttcag cttcgatgta ggagggcgtg
4621 gatatgtcct gcgggtaaat agctgcgccg atggtttcta caaagatcgt tatgtttatc
4681 ggcactttgc atcggccgcg ctcccgattc cggaagtgct tgacattggg gagtttagcg
4741 agagcctgac ctattgcatc tcccgccgtg cacagggtgt cacgttgcaa gacctgcctg
4801 aaaccgaact gcccgctgtt ctacaaccgg tcgcggaggc tatggatgcg atcgctgcgg
4861 ccgatcttag ccagacgagc gggttcggcc cattcggacc gcaaggaatc ggtcaataca
4921 ctacatggcg tgatttcata tgcgcgattg ctgatcccca tgtgtatcac tggcaaactg
4981 tgatggacga caccgtcagt gcgtccgtcg cgcaggctct cgatgagctg atgctttggg
5041 ccgaggactg ccccgaagtc cggcacctcg tgcacgcgga tttcggctcc aacaatgtcc
5101 tgacggacaa tggccgcata acagcggtca ttgactggag cgaggcgatg ttcggggatt
5161 cccaatacga ggtcgccaac atcttcttct ggaggccgtg gttggcttgt atggagcagc
5221 agacgcgcta cttcgagcgg aggcatccgg agcttgcagg atcgccacga ctccgggcgt
5281 atatgctccg cattggtctt gaccaactct atcagagctt ggttgacggc aatttcgatg
5341 atgcagcttg ggcgcagggt cgatgcgacg caatcgtccg atccggagcc gggactgtcg
5401 ggcgtacaca aatcgcccgc agaagcgcgg ccgtctggac cgatggctgt gtagaagtac
5461 tcgccgatag tggaaaccga cgccccagca ctcgtccgag ggcaaagaaa tagtccgtcg
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5581 tcttgcgatg attatcatat aatttctgtt gaattacgtt aagcatgtaa taattaacat
5641 gtaatgcata gtaccgagaa actagtggat ctaaacataa aatctgtaaa ataacaagat
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6601 tgacatcgac accaacgatc ttatatccag attcgtcaag ctgtttgatg atttcagtaa
6661 cgttaagtgg atctcggtga cgggcaggac cggacggggc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBARGPE1-Hygro-EGFP真菌表达质粒
别称: pBARGPE1-Hygro-EGFP
| 启动子: | gpdA |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | trpC terminator |
| 质粒分类: | 丝状真菌绿色荧光表达质粒 |
| 质粒大小: | 6700bp |
| 质粒标签: | 增强型绿色荧光蛋白EGFP |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 丝状真菌 |
| 5'测序引物: | 根据全序列设计 |
| 3'测序引物: | 根据全序列设计 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Hyg |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pBARGPE1-Hygro-EGFP是一个大肠杆菌-丝状真菌穿梭绿色荧光表达质粒，转化至大肠杆菌可用氨苄抗生素（终浓度100ug/ml）筛选，转化至丝状真菌中可用潮霉素Hygromycin（具体浓度请先做预实验测试或者参考相关文献）筛选，在真菌中可利用gpdA promoter启动绿色荧光蛋白EGFP的表达。因为本质粒的EGFP携带有终止密码子，所以不方便再克隆外源目的基因进入.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6700 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pBARGPE1-Hygro-EGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6700)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6700
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(55..774)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
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EFVTAAGITLGMDELYK"
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/note="gpdA Promoter"
misc_feature 1754..1894
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(2080..2668)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2839..3699)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
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related antibiotics"
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LIKHW"
promoter complement(3700..3804)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
misc_feature 4102..4487
/note="TrpC Promotor"
CDS 4488..5513
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/gene="aph(4)-Ia"
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TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
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/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
protein_bind 6016..6049
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/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
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/note="trpC terminator"
ORIGIN
1 ggtaccgggc cccccctcga ggtcgacggt atcgataagc ttgatatcga attcttactt
61 gtacagctcg tccatgccga gagtgatccc ggcggcggtc acgaactcca gcaggaccat
121 gtgatcgcgc ttctcgttgg ggtctttgct cagggcggac tgggtgctca ggtagtggtt
181 gtcgggcagc agcacggggc cgtcgccgat gggggtgttc tgctggtagt ggtcggcgag
241 ctgcacgctg ccgtcctcga tgttgtggcg gatcttgaag ttcaccttga tgccgttctt
301 ctgcttgtcg gccatgatat agacgttgtg gctgttgtag ttgtactcca gcttgtgccc
361 caggatgttg ccgtcctcct tgaagtcgat gcccttcagc tcgatgcggt tcaccagggt
421 gtcgccctcg aacttcacct cggcgcgggt cttgtagttg ccgtcgtcct tgaagaagat
481 ggtgcgctcc tggacgtagc cttcgggcat ggcggacttg aagaagtcgt gctgcttcat
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601 ccagggcacg ggcagcttgc cggtggtgca gatgaacttc agggtcagct tgccgtaggt
661 ggcatcgccc tcgccctcgc cggacacgct gaacttgtgg ccgtttacgt cgccgtccag
721 ctcgaccagg atgggcacca ccccggtgaa cagctcctcg cccttgctca ccatggatcc
781 tctagagtcg aggtcgacgg tatcgataag cttgattaaa ggttcttgga tgggaagatg
841 aatatactga agatgggaaa agaaagagaa aagaaaagag cagctggtgg ggagagcagg
901 aaaatatggc aacaaatgtt ggactgacgc aacgaccttg tcaaccccgc cgacacaccg
961 ggcggacaga cggggcaaag ctgcctacca gggactgagg gacctcagca ggtcgagtgc
1021 agagcaccgg atgggtcgac tgccagcttg tgttcccggt ctgcgccgct ggccagctcc
1081 tgagcggcct ttccggtttc atacaccggg caaagcagga gaggcacgat atttggacgc
1141 cctacagatg ccggatgggc caattaggga gcttacgcgc cgggtactcg ctctacctac
1201 ttcggagaag gtactatctc gtgaatcttt taccagatcg gaagcaattg gacttctgta
1261 cctaggttaa tggcatgcta tttcgccgac ggctatacac ccctggcttc acattctcct
1321 tcgcttactg ccggtgattc gatgaagctc catattctcc gatgatgcaa tagattcttg
1381 gtcaacgagg ggcacaccag cctttccact tcggggcgga ggggcggccg gtcccggatt
1441 aataatcatc cactgcacct cagagccgcc agagctgtct ggcgcagtgg cgcttattac
1501 tcagcccttc tctctgcgtc cgtccgtctc tccgcatgct ttgcatactt ctgcctgctg
1561 gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagagat ctctgcctcg
1621 cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag
1681 cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg
1741 gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct
1801 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
1861 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga
1921 ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat
1981 acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca
2041 aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc
2101 tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata
2161 aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc
2221 gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc
2281 acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga
2341 accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc
2401 ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag
2461 gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag
2521 aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag
2581 ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca
2641 gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga
2701 cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat
2761 cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga
2821 gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg
2881 tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga
2941 gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc
3001 agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac
3061 tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc
3121 agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc
3181 gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc
3241 catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt
3301 ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc
3361 atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg
3421 tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag
3481 cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat
3541 cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc
3601 atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa
3661 aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta
3721 ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa
3781 aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga
3841 aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct
3901 tcaagaatta attcggtcga aaaaagaaaa ggagagggcc aagagggagg gcattggtga
3961 ctattgagca cgtgagtata cgtgattaag cacacaaagg cagcttggag tatgtctgtt
4021 attaatttca caggtagttc tggtccattg gtgaaagttt gcggcttgca gagcacagag
4081 gccgcagaat gtgctctaga ctcgacagaa gatgatattg aaggagcact ttttgggctt
4141 ggctggagct agtggaggtc aacaatgaat gcctattttg gtttagtcgt ccaggcggtg
4201 agcacaaaat ttgtgtcgtt tgacaagatg gttcatttag gcaactggtc agatcagccc
4261 cacttgtagc agtagcggcg gcgctcgaag tgtgactctt attagcagac aggaacgagg
4321 acattattat catctgctgc ttggtgcacg ataacttggt gcgtttgtca agcaaggtaa
4381 gtgaacgacc cggtcatacc ttcttaagtt cgcccttcct ccctttattt cagattcaat
4441 ctgacttacc tattctaccc aagcaaagct tcgattagga agtaaccatg aaaaagcctg
4501 aactcaccgc gacgtctgtc gagaagtttc tgatcgaaaa gttcgacagc gtctccgacc
4561 tgatgcagct ctcggagggc gaagaatctc gtgctttcag cttcgatgta ggagggcgtg
4621 gatatgtcct gcgggtaaat agctgcgccg atggtttcta caaagatcgt tatgtttatc
4681 ggcactttgc atcggccgcg ctcccgattc cggaagtgct tgacattggg gagtttagcg
4741 agagcctgac ctattgcatc tcccgccgtg cacagggtgt cacgttgcaa gacctgcctg
4801 aaaccgaact gcccgctgtt ctacaaccgg tcgcggaggc tatggatgcg atcgctgcgg
4861 ccgatcttag ccagacgagc gggttcggcc cattcggacc gcaaggaatc ggtcaataca
4921 ctacatggcg tgatttcata tgcgcgattg ctgatcccca tgtgtatcac tggcaaactg
4981 tgatggacga caccgtcagt gcgtccgtcg cgcaggctct cgatgagctg atgctttggg
5041 ccgaggactg ccccgaagtc cggcacctcg tgcacgcgga tttcggctcc aacaatgtcc
5101 tgacggacaa tggccgcata acagcggtca ttgactggag cgaggcgatg ttcggggatt
5161 cccaatacga ggtcgccaac atcttcttct ggaggccgtg gttggcttgt atggagcagc
5221 agacgcgcta cttcgagcgg aggcatccgg agcttgcagg atcgccacga ctccgggcgt
5281 atatgctccg cattggtctt gaccaactct atcagagctt ggttgacggc aatttcgatg
5341 atgcagcttg ggcgcagggt cgatgcgacg caatcgtccg atccggagcc gggactgtcg
5401 ggcgtacaca aatcgcccgc agaagcgcgg ccgtctggac cgatggctgt gtagaagtac
5461 tcgccgatag tggaaaccga cgccccagca ctcgtccgag ggcaaagaaa tagtccgtcg
5521 acctgcagat cgttcaaaca tttggcaata aagtttctta agattgaatc ctgttgccgg
5581 tcttgcgatg attatcatat aatttctgtt gaattacgtt aagcatgtaa taattaacat
5641 gtaatgcata gtaccgagaa actagtggat ctaaacataa aatctgtaaa ataacaagat
5701 gtaaagataa tgctaaatca tttggctttt tgattgattg tacaggaaaa tatacatcgc
5761 agggggttga cttttaccat ttcaccgcaa tggaatcaaa cttgttgaag agaatgttca
5821 caggcgcata cgctacaatg acccgattct tgctagcctt ttctcggtct tgcaaacaac
5881 cgccgcggcc ggtcgaggga cctaataact tcgtatagca tacattatac gaagttatat
5941 taagggttcc ggatcgcggc cgctcgacct gcagccaagc tagcttggct ggacgtaaac
6001 tcctcttcag acctaataac ttcgtatagc atacattata cgaagttata ttaagggtta
6061 ttgaatatga tcggaattgg tcgatcaggt attgctgtta tctgatgagt atacgttgtc
6121 ctggccacgg cagaagcacg cttatcgctc caatttccca caacattagt caactccgtt
6181 aggcccttca ttgaaagaaa tgaggtcatc aaatgtcttc caatgtgaga ttttgggcca
6241 ttttttatag caaagattga ataaggcgca tttttcttca aagcttgcaa attaaagcct
6301 tcgagcgtcc caaaaccttc tcaagcaagg ttttcagtat aatgttacat gcgtacacgc
6361 gctatatttt gttttctatc gcgtattaaa tgtataattg cgggactcta atcataaaaa
6421 cccatctcat aaataacgtc atgcattgca gatgagctgt atctggaaga ggtaaacccg
6481 aaacgcgttt tattcttgtt gacatggagc tattaaatca ctagaaggca ctctttgctg
6541 cttggacaaa tgaacgtatc ttatcgagat cctgaacacc atttgtctca actccggagc
6601 tgacatcgac accaacgatc ttatatccag attcgtcaag ctgtttgatg atttcagtaa
6661 cgttaagtgg atctcggtga cgggcaggac cggacggggc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1163/pT7-His-TRAF6-S12F人源基因质粒 |
| P1164/pT7-His-GSK3B人源基因质粒 |
| P1165/pT7-His-CD1D人源基因质粒 |
| P1187/pT7-His-LGALS13人源基因质粒 |
| P0610/pT7-His-Survium人源基因质粒 |
| P1191/pT7-His-Nrf2人源基因质粒 |
| P1192/pT7-His-Smad3人源基因质粒 |
| P1193/pT7-His-FNDC5人源基因质粒 |
| P1194/pT7-His-VEGFA人源基因质粒 |
| P1239/pT7-His-DRD2人源基因质粒 |
| P1240/pT7-His-DRD3人源基因质粒 |
| P1241/pT7-His-pCSK9人源基因质粒 |
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pBARGPE1-Hygro-EGFP真菌表达质粒
￥100 - 1000
