L4440线虫干扰质粒

基本信息
名称：L4440线虫干扰质粒
别称: Plasmid#1654

启动子:	T7
复制子:	pUC
质粒分类:	线虫RNAI干扰载体；Worm Expression RNAi
质粒大小:	2790bp
质粒标签:	lacZN, OriF1
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	线虫，worm
诱导方式:	IPTG
5'测序引物:	根据全序列设计

质粒属性

载体宿主：	昆虫细胞
载体用途：	干扰沉默
基因种属：	空载体
基因类型：	shRNA
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                2790 bp ds-DNA     circular SYN 04-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    L4440
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 2790)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..2790
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        19..37
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     primer_bind     95..111
                     /note="SK primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     primer_bind     complement(181..197)
                     /note="KS primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     promoter        complement(223..241)
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     primer_bind     complement(251..267)
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     rep_origin      409..864
                     /direction=RIGHT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        890..994
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             995..1855
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      2026..2614
                     /direction=RIGHT
                     /note="pUC ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 aacctggctt atcgaaatta atacgactca ctatagggag accggcagat ctgatatcat
       61 cgatgaattc gagctccacc gcggtggcgg ccgctctaga actagtggat ccaccggttc
      121 catggctagc cacgtgacgc gtggatcccc cgggctgcag gaattcgata tcaagcttat
      181 cgataccgtc gacctcgagg gggggcccgg tacccaattc gccctatagt gagtcgtatt
      241 acgcgcgctc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc
      301 aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc
      361 gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatgggac gcgccctgta
      421 gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca
      481 gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct
      541 ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc
      601 acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat
      661 agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc
      721 aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc
      781 cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaatttta
      841 acaaaatatt aacgcttaca atttaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc
      901 tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg
      961 ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc
     1021 ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt
     1081 gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct
     1141 caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac
     1201 ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact
     1261 cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa
     1321 gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga
     1381 taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt
     1441 tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga
     1501 agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg
     1561 caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat
     1621 ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat
     1681 tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc
     1741 agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga
     1801 tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc
     1861 agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag
     1921 gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc
     1981 gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt
     2041 tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt
     2101 gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat
     2161 accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc
     2221 accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa
     2281 gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg
     2341 ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag
     2401 atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag
     2461 gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa
     2521 cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt
     2581 gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg
     2641 gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc
     2701 tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac
     2761 cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3991/pCMV-SPORT6-KCNS3人源基因质粒

P3992/pCMV-SPORT6-MVK人源基因质粒

P3993/pCMV-SPORT6-NXF2（1同义突变）人源基因质粒

P3994/pCMV-SPORT6-BIRC2人源基因质粒

P3995/pCMV-SPORT6-RWDD4（1点突变）人源基因质粒

P3996/pCMV-SPORT6-ZNF707（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3997/pCMV-SPORT6-LUC7L2（1点突变）人源基因质粒

P3998/pCMV-SPORT6-EFCAB7人源基因质粒

P3999/pCMV-SPORT6-CTH人源基因质粒

P4000/pCMV-SPORT6-EIF3D人源基因质粒

P4001/pCMV-SPORT6-VAT1人源基因质粒