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- 上海
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pAD123
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pAD123枯草胞内质粒
别称: pAD123
质粒属性
质粒简介
蜡状芽孢杆菌的启动子捕获质粒pAD123，该质粒无启动子，其编码绿色荧光蛋白GFPmut3a的突变型，其针对荧光激活细胞分选进行优化Cormack，绿色荧光蛋白（GFP）的FACS优化突变体）。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 5952 bp ds-DNA circular SYN 29-5-2015
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5952)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-5-29 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5952
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/note="GFP"
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NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKV
NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE
FVTAAGITHGMDELYK"
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replication"
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related antibiotics"
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LIKHW"
promoter complement(5748..5852)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gaattcgagc tcggtacccg gggatcctct agatttaaga aggagatata catatgagta
61 aaggagaaga acttttcact ggagttgtcc caattcttgt tgaattagat ggtgatgtta
121 atgggcacaa attttctgtc agtggagagg gtgaaggtga tgcaacatac ggaaaactta
181 cccttaaatt tatttgcact actggaaaac tacctgttcc atggccaaca cttgtcacta
241 ctttcgggta tggtgttcaa tgctttgcga gatacccaga tcatatgaaa cagcatgact
301 ttttcaagag tgccatgccc gaaggttatg tacaggaaag aactatattt ttcaaagatg
361 acgggaacta caagacacgt gctgaagtca agtttgaagg tgataccctt gttaatagaa
421 tcgagttaaa aggtattgat tttaaagaag atggaaacat tcttggacac aaattggaat
481 acaactataa ctcacacaat gtatacatca tggcagacaa acaaaagaat ggaatcaaag
541 ttaacttcaa aattagacac aacattgaag atggaagcgt tcaactagca gaccattatc
601 aacaaaatac tccaattggc gatggccctg tccttttacc agacaaccat tacctgtcca
661 cacaatctgc cctttcgaaa gatcccaacg aaaagagaga ccacatggtc cttcttgagt
721 ttgtaacagc tgctgggatt acacatggca tggatgaact atacaaataa atctcctgca
781 ggcatgcaag cttgagtagg acaaatccgc cgagcttcga cgagattttc aggagctaag
841 gaagctaaaa tggagaaaaa aatcactgga tataccaccg ttgatatatc ccaatggcat
901 cgtaaagaac attttgaggc atttcagtca gttgctcaat gtacctataa ccagaccgtt
961 cagaacaaag aatacaagaa aatatttaca aaaaatcaat ttaacaattc cttaaaacat
1021 gcaggaattg acgatttaaa caatattagc tttgaacaat tcttatctct tttcaatagc
1081 tataaattat ttaataagta agttaaggga tgcataaact gcatccctta acttgttttt
1141 cgtgtgccta ttttttgtga atcgctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa
1201 aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct
1261 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag
1321 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc
1381 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatacaaaa catatttcaa cacaatacaa
1441 atgggttagt taaaaaagca ggccttctaa aggtctgctt tttttatttg attatgtaat
1501 ttttaatgcc aggatgccaa taagccataa cctcaaatgc accatttgca acctcgtcat
1561 cttcttcctc aatcttgacc agatcgccgt cctccgcatc accaagattc agctctttat
1621 gtatctcctt caaaatgcca ccgtatccaa ttaaccttcg agctgccaac gcatcatcca
1681 agtaaagcac cgtgttcaga ttgtcttcag tcaccttatt accgcgcaca caatccgtat
1741 ccttaaccgg atatttagag atttcgcgaa cagctttttg ctccatcatt gcgttccgca
1801 catcgttttc aatctgttca gcgtcaatct tagctttacc tttcactcga cgaatatcga
1861 caattggagt gtaatccaat ttcatcgcct ttttccaaag gctcgtccac tccgcctgct
1921 taatatagtt tttcccaaaa taatttttcc ttactggtat caacacatga aaatgaggat
1981 gatatgtatc ttcttcatga tttttggtaa tctctaaagc tctgaaaaat ccaagaaccg
2041 aagtttttac ttttttgtac tggaacagtt tcctaaagcc ttccatcatc gcagaaattt
2101 gtggcttcag ccgttctccc tttacatttc gaatcgtcag cgtgagaaaa atccatccgc
2161 agccgtactg tctattggct tcctctacga tcaacttatt gtgataagca atttttaacg
2221 acctgcgcca cgcacacatc ggacataacc tcactttaca aaaatgggct tgatacagtt
2281 ttaacttgcc cgtctccggg tctctcttaa acgaaagata ctctgcacaa ctaattagtt
2341 tttcagcctt tttgccatag taaggtgccc caatcttact ctctaacgct tcgtaatgct
2401 ccgccatgag gttcgtccgt ctctttttcc ccttccaatc ccgcttttta cctgttgcgg
2461 ttttatcttc gaggatgcta taatcatttt cagatgaata aatcaacaaa aaaactcctt
2521 ctgagctagt tctctagcat tctattattt tgattcgaca ccttaataat agcagaagga
2581 gtttttacct gtcaaagaac catcaaaccc ttgatacaca aggctttgac ctaattttga
2641 aaaatgatgt tgtttctata tagtatcaag ataagaaaga aaaggatttt tcgctacgct
2701 caaatccttt aaaaaaacac aaaagaccac attttttaat gtggtcttta ttcttcaact
2761 aaagcaccca ttagttcaac aaacgaaaat tggataaagt gggatatttt taaaatatat
2821 atttatgtta cagtaatatt gacttttaaa aaaggattga ttctaatgaa gaaagcagac
2881 aagtaagcct cctaaattca ctttagataa aaatttagga ggcatatcaa atgaacttta
2941 ataaaattga tttagacaat tggaagagaa aagagatatt taatcattat ttgaaccaac
3001 aaacgacttt tagtataacc acagaaattg atattagtgt tttataccga aacataaaac
3061 aagaaggata taaattttac cctgcattta ttttcttagt gacaagggtg ataaactcaa
3121 atacagcttt tagaactggt tacaatagcg acggagagtt aggttattgg gataagttag
3181 agccacttta tacaattttt gatggtgtat ctaaaacatt ctctggtatt tggactcctg
3241 taaagaatga cttcaaagag ttttatgatt tatacctttc tgatgtagag aaatataatg
3301 gttcggggaa attgtttccc aaaacaccta tacctgaaaa tgctttttct ctttctatta
3361 ttccatggac ttcatttact gggtttaact taaatatcaa taataatagt aattaccttc
3421 tacccattat tacagcagga aaattcatta ataaaggtaa ttcaatatat ttaccgctat
3481 ctttacaggt acatcattct gtttgtgatg gttatcatgc aggattgttt atgaactcta
3541 ttcaggaatt gtcagatagg cctaatgact ggcttttata atatgagata atgccgactg
3601 tactttttac agtcggtttt ctaatgtcac taacctgccc cgttagtcgc cattcgccag
3661 ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac
3721 ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc
3781 gggtgttggc gggtgtcggg gcgcagccat gacccagtca cgtagcgata gcggagtgta
3841 tactggctta actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt
3901 gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgctcttc cgcttcctcg
3961 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
4021 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
4081 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
4141 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
4201 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
4261 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
4321 caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
4381 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
4441 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
4501 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
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4861 atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca
4921 gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg
4981 atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca
5041 ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt
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5161 agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctgcaggcat cgtggtgtca
5221 cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca
5281 tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga
5341 agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact
5401 gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga
5461 gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caacacggga taataccgcg
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5641 tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat
5701 gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt
5761 caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt
5821 atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac
5881 gtctaagaaa ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc
5941 tttcgtcttc aa
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pAD123枯草胞内质粒
别称: pAD123
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 质粒分类: | 枯草系列质粒；枯草整合质粒；枯草胞内质粒 |
| 质粒大小: | 5952bp |
| 质粒标签: | C-GFP |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 枯草芽孢杆菌 |
| 5'测序引物: | Amp-F（GGGTTATTGTCTCATGAGCGG） |
| 3'测序引物: | GFP-R（CCATCTAATTCAACAAGAATTGGGACAAC） |
| 备注: | 枯草杆菌启动子报告质粒 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
蜡状芽孢杆菌的启动子捕获质粒pAD123，该质粒无启动子，其编码绿色荧光蛋白GFPmut3a的突变型，其针对荧光激活细胞分选进行优化Cormack，绿色荧光蛋白（GFP）的FACS优化突变体）。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 5952 bp ds-DNA circular SYN 29-5-2015
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5952)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-5-29 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5952
/organism="synthetic DNA construct"
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LIKHW"
promoter complement(5748..5852)
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ORIGIN
1 gaattcgagc tcggtacccg gggatcctct agatttaaga aggagatata catatgagta
61 aaggagaaga acttttcact ggagttgtcc caattcttgt tgaattagat ggtgatgtta
121 atgggcacaa attttctgtc agtggagagg gtgaaggtga tgcaacatac ggaaaactta
181 cccttaaatt tatttgcact actggaaaac tacctgttcc atggccaaca cttgtcacta
241 ctttcgggta tggtgttcaa tgctttgcga gatacccaga tcatatgaaa cagcatgact
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361 acgggaacta caagacacgt gctgaagtca agtttgaagg tgataccctt gttaatagaa
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1801 catcgttttc aatctgttca gcgtcaatct tagctttacc tttcactcga cgaatatcga
1861 caattggagt gtaatccaat ttcatcgcct ttttccaaag gctcgtccac tccgcctgct
1921 taatatagtt tttcccaaaa taatttttcc ttactggtat caacacatga aaatgaggat
1981 gatatgtatc ttcttcatga tttttggtaa tctctaaagc tctgaaaaat ccaagaaccg
2041 aagtttttac ttttttgtac tggaacagtt tcctaaagcc ttccatcatc gcagaaattt
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2161 agccgtactg tctattggct tcctctacga tcaacttatt gtgataagca atttttaacg
2221 acctgcgcca cgcacacatc ggacataacc tcactttaca aaaatgggct tgatacagtt
2281 ttaacttgcc cgtctccggg tctctcttaa acgaaagata ctctgcacaa ctaattagtt
2341 tttcagcctt tttgccatag taaggtgccc caatcttact ctctaacgct tcgtaatgct
2401 ccgccatgag gttcgtccgt ctctttttcc ccttccaatc ccgcttttta cctgttgcgg
2461 ttttatcttc gaggatgcta taatcatttt cagatgaata aatcaacaaa aaaactcctt
2521 ctgagctagt tctctagcat tctattattt tgattcgaca ccttaataat agcagaagga
2581 gtttttacct gtcaaagaac catcaaaccc ttgatacaca aggctttgac ctaattttga
2641 aaaatgatgt tgtttctata tagtatcaag ataagaaaga aaaggatttt tcgctacgct
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3001 aaacgacttt tagtataacc acagaaattg atattagtgt tttataccga aacataaaac
3061 aagaaggata taaattttac cctgcattta ttttcttagt gacaagggtg ataaactcaa
3121 atacagcttt tagaactggt tacaatagcg acggagagtt aggttattgg gataagttag
3181 agccacttta tacaattttt gatggtgtat ctaaaacatt ctctggtatt tggactcctg
3241 taaagaatga cttcaaagag ttttatgatt tatacctttc tgatgtagag aaatataatg
3301 gttcggggaa attgtttccc aaaacaccta tacctgaaaa tgctttttct ctttctatta
3361 ttccatggac ttcatttact gggtttaact taaatatcaa taataatagt aattaccttc
3421 tacccattat tacagcagga aaattcatta ataaaggtaa ttcaatatat ttaccgctat
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3541 ttcaggaatt gtcagatagg cctaatgact ggcttttata atatgagata atgccgactg
3601 tactttttac agtcggtttt ctaatgtcac taacctgccc cgttagtcgc cattcgccag
3661 ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac
3721 ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc
3781 gggtgttggc gggtgtcggg gcgcagccat gacccagtca cgtagcgata gcggagtgta
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5341 agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact
5401 gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4798/pCMV-SPORT6-SP100(1点突变）人源基因质粒 |
| P4799/pCMV-SPORT6-CANX人源基因质粒 |
| P4800/pCMV-SPORT6-YTHDF3人源基因质粒 |
| P4801/pCMV-SPORT6-RINT1人源基因质粒 |
| P4802/pCMV-SPORT6-SRSF1人源基因质粒 |
| P4803/pCMV-SPORT6-MEPCE人源基因质粒 |
| P4804/pCMV-SPORT6-FAM110A人源基因质粒 |
| P4805/pCMV-SPORT6-LOC554207人源基因质粒 |
| P4806/pCMV-SPORT6-FGF21人源基因质粒 |
| P4807/pCMV-SPORT6-TRIM2人源基因质粒 |
| P4808/pCMV-SPORT6-PPM1A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 2 给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质粒载体是由枯草芽孢杆菌隐性质粒与大肠杆菌质粒构成的穿梭载体，可在大肠杆菌中完成基因片段的连接克隆
-OmpA 大肠杆菌质粒 Amp 带His标签和OmpA分泌信号肽 pTrc-CKS 大肠杆菌质粒 Amp 带His和CKS融合标签 pMBP-C 大肠杆菌质粒 Amp 胞内表达，His和MBP标签，带凝血酶位点
，提取基因组，mRNA逆转录。 我在研究生阶段只是涉及了前面两种比较常用的方式。其中，提取质粒建议使用omega或者maxgen这两种试剂盒进行提取。操作步骤按照说明书即可。 其中质粒提取，需要注意的点为 1 不宜加入过多的菌体，平均一个EP管最多加入2ml OD=3的离心菌体。最好是加入OD=2就可以了。OD不需要事先去测量，大致上通过肉眼估计一下即可。一般来讲2-4mlOD=2的菌体就足够你获得很浓的质粒了（假如是PET28a这种就需要多加一点，一般使用20ml。因为一个细胞内只有10
pAD123枯草胞内质粒
￥100 - 1000
