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- Xybio
- 上海
- P0125
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pHT-01
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pHT01枯草胞内质粒
别称: pHT-01
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7956 bp ds-DNA circular SYN 07-2-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7956)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-2-7 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7956
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
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/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
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/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter 6033..6137
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
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/gene="bla"
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/note="AmpR"
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related antibiotics"
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LIKHW"
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/note="ori"
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replication"
ORIGIN
1 ttaagttatt ggtatgactg gttttaagcg caaaaaaagt tgctttttcg tacctattaa
61 tgtatcgttt tagaaaaccg actgtaaaaa gtacagtcgg cattatctca tattataaaa
121 gccagtcatt aggcctatct gacaattcct gaatagagtt cataaacaat cctgcatgat
181 aaccatcaca aacagaatga tgtacctgta aagatagcgg taaatatatt gaattacctt
241 tattaatgaa ttttcctgct gtaataatgg gtagaaggta attactatta ttattgatat
301 ttaagttaaa cccagtaaat gaagtccatg gaataataga aagagaaaaa gcattttcag
361 gtataggtgt tttgggaaac aatttccccg aaccattata tttctctaca tcagaaaggt
421 ataaatcata aaactctttg aagtcattct ttacaggagt ccaaatacca gagaatgttt
481 tagatacacc atcaaaaatt gtataaagtg gctctaactt atcccaataa cctaactctc
541 cgtcgctatt gtaaccagtt ctaaaagctg tatttgagtt tatcaccctt gtcactaaga
601 aaataaatgc agggtaaaat ttatatcctt cttgttttat gtttcggtat aaaacactaa
661 tatcaatttc tgtggttata ctaaaagtcg tttgttggtt caaataatga ttaaatatct
721 cttttctctt ccaattgtct aaatcaattt tattaaagtt catttgatat gcctcctaaa
781 tttttatcta aagtgaattt aggaggctta cttgtctgct ttcttcatta gaatcaatcc
841 ttttttaaaa gtcaatatta ctgtaacata aatatatatt ttaaaaatat cccactttat
901 ccaattttcg tttgttgaac taatgggtgc tttagttgaa gaataaaaga ccacattaaa
961 aaatgtggtc ttttgtgttt ttttaaagga tttgagcgta gcgaaaaatc cttttctttc
1021 ttatcttgat aataagggta actattgccg atcgtccatt ccgacagcat cgccagtcac
1081 tatggcgtgc tgctagcgcc attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc
1141 ggtgcgggcc tcttcgctat tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt
1201 aagttgggta acgccagggt tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt
1261 cgagctcagg ccttaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg
1321 aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg
1381 tattgggcgc cagggtggtt tttcttttca ccagtgagac gggcaacagc tgattgccct
1441 tcaccgcctg gccctgagag agttgcagca agcggtccac gctggtttgc cccagcaggc
1501 gaaaatcctg tttgatggtg gttaacggcg ggatataaca tgagctgtct tcggtatcgt
1561 cgtatcccac taccgagata tccgcaccaa cgcgcagccc ggactcggta atggcgcgca
1621 ttgcgcccag cgccatctga tcgttggcaa ccagcatcgc agtgggaacg atgccctcat
1681 tcagcatttg catggtttgt tgaaaaccgg acatggcact ccagtcgcct tcccgttccg
1741 ctatcggctg aatttgattg cgagtgagat atttatgcca gccagccaga cgcagacgcg
1801 ccgagacaga acttaatggg cccgctaaca gcgcgatttg ctggtgaccc aatgcgacca
1861 gatgctccac gcccagtcgc gtaccgtctt catgggagaa aataatactg ttgatgggtg
1921 tctggtcaga gacatcaaga aataacgccg gaacattagt gcaggcagct tccacagcaa
1981 tggcatcctg gtcatccagc ggatagttaa tgatcagccc actgacgcgt tgcgcgagaa
2041 gattgtgcac cgccgtttta caggcttcga cgccgcttcg ttctaccatc gacaccacca
2101 cgctggcacc cagttgatcg gcgcgagatt taatcgccgc gacaatttgc gacggcgcgt
2161 gcagggccag actggaggtg gcaacgccaa tcagcaacga ctgtttgccc gccagttgtt
2221 gtgccacgcg gttgggaatg taattcagct ccgccatcgc cgcttccact ttttcccgcg
2281 ttttcgcaga aacgtggctg gcctggttca ccacgcggga aacggtctga taagagacac
2341 cggcatactc tgcgacatcg tataacgtta ctggtttcat caaaatcgtc tccctccgtt
2401 tgaatatttg attgatcgta accagatgaa gcactctttc cactatccct acagtgttat
2461 ggcttgaaca atcacgaaac aataattggt acgtacgatc tttcagccga ctcaaacatc
2521 aaatcttaca aatgtagtct ttgaaagtat tacatatgta agatttaaat gcaaccgttt
2581 tttcggaagg aaatgatgac ctcgtttcca ccggaattag cttggtacca gctattgtaa
2641 cataatcggt acgggggtga aaaagctaac ggaaaaggga gcggaaaaga atgatgtaag
2701 cgtgaaaaat tttttatctt atcacttgaa attggaaggg agattcttta ttataagaat
2761 tgtggaattg tgagcggata acaattccca attaaaggag gaaggatcct ctagagtcga
2821 cgtccccggg gcagcccgcc taatgagcgg gcttttttca cgtcacgcgt ccatggagat
2881 ctttgtctgc aactgaaaag tttatacctt acctggaaca aatggttgaa acatacgagg
2941 ctaatatcgg cttattagga atagtccctg tactaataaa atcaggtgga tcagttgatc
3001 agtatatttt ggacgaagct cggaaagaat ttggagatga cttgcttaat tccacaatta
3061 aattaaggga aagaataaag cgatttgatg ttcaaggaat cacggaagaa gatactcatg
3121 ataaagaagc tctaaaacta ttcaataacc ttacaatgga attgatcgaa agggtggaag
3181 gttaatggta cgaaaattag gggatctacc tagaaagcca caaggcgata ggtcaagctt
3241 aaagaaccct tacatggatc ttacagattc tgaaagtaaa gaaacaacag aggttaaaca
3301 aacagaacca aaaagaaaaa aagcattgtt gaaaacaatg aaagttgatg tttcaatcca
3361 taataagatt aaatcgctgc acgaaattct ggcagcatcc gaagggaatt catattactt
3421 agaggatact attgagagag ctattgataa gatggttgag acattacctg agagccaaaa
3481 aactttttat gaatatgaat taaaaaaaag aaccaacaaa ggctgagaca gactccaaac
3541 gagtctgttt ttttaaaaaa aatattagga gcattgaata tatattagag aattaagaaa
3601 gacatgggaa taaaaatatt ttaaatccag taaaaatatg ataagattat ttcagaatat
3661 gaagaactct gtttgttttt gatgaaaaaa caaacaaaaa aaatccacct aacggaatct
3721 caatttaact aacagcggcc aaactgagaa gttaaatttg agaaggggaa aaggcggatt
3781 tatacttgta tttaactatc tccattttaa cattttatta aaccccatac aagtgaaaat
3841 cctcttttac actgttcctt taggtgatcg cggagggaca ttatgagtga agtaaaccta
3901 aaaggaaata cagatgaatt agtgtattat cgacagcaaa ccactggaaa taaaatcgcc
3961 aggaagagaa tcaaaaaagg gaaagaagaa gtttattatg ttgctgaaac ggaagagaag
4021 atatggacag aagagcaaat aaaaaacttt tctttagaca aatttggtac gcatatacct
4081 tacatagaag gtcattatac aatcttaaat aattacttct ttgatttttg gggctatttt
4141 ttaggtgctg aaggaattgc gctctatgct cacctaactc gttatgcata cggcagcaaa
4201 gacttttgct ttcctagtct acaaacaatc gctaaaaaaa tggacaagac tcctgttaca
4261 gttagaggct acttgaaact gcttgaaagg tacggtttta tttggaaggt aaacgtccgt
4321 aataaaacca aggataacac agaggaatcc ccgattttta agattagacg taaggttcct
4381 ttgctttcag aagaactttt aaatggaaac cctaatattg aaattccaga tgacgaggaa
4441 gcacatgtaa agaaggcttt aaaaaaggaa aaagagggtc ttccaaaggt tttgaaaaaa
4501 gagcacgatg aatttgttaa aaaaatgatg gatgagtcag aaacaattaa tattccagag
4561 gccttacaat atgacacaat gtatgaagat atactcagta aaggagaaat tcgaaaagaa
4621 atcaaaaaac aaatacctaa tcctacaaca tcttttgaga gtatatcaat gacaactgaa
4681 gaggaaaaag tcgacagtac tttaaaaagc gaaatgcaaa atcgtgtctc taagccttct
4741 tttgatacct ggtttaaaaa cactaagatc aaaattgaaa ataaaaattg tttattactt
4801 gtaccgagtg aatttgcatt tgaatggatt aagaaaagat atttagaaac aattaaaaca
4861 gtccttgaag aagctggata tgttttcgaa aaaatcgaac taagaaaagt gcaataaact
4921 gctgaagtat ttcagcagtt ttttttattt agaaatagtg aaaaaaatat aatcagggag
4981 gtatcaatat ttaatgagta ctgatttaaa tttatttaga ctggaattaa taattaacac
5041 gtagactaat taaaatttaa tgagggataa agaggataca aaaatattaa tttcaatccc
5101 tattaaattt taacaagggg gggattaaaa tttaattaga ggtttatcca caagaaaaga
5161 ccctaataaa atttttacta gggttataac actgattaat ttcttaatgg gggagggatt
5221 aaaatttaat gacaaagaaa acaatctttt aagaaaagct tttaaaagat aataataaaa
5281 agagctttgc gattaagcaa aactctttac tttttcattg acattatcaa attcatcgat
5341 ttcaaattgt tgttgtatca taaagttaat tctgttttgc acaacctttt caggaatata
5401 aaacacatct gaggcttgtt ttataaactc agggtcgcta aagtcaatgt aacgtagcat
5461 atgatatggt atagcttcca cccaagttag cctttctgct tcttctgaat gtttttcata
5521 tacttccatg ggtatctcta aatgattttc ctcatgtagc aaggtatgag caaaaagttt
5581 atggaattga tagttcctct ctttttcttc aactttttta tctaaaacaa acactttaac
5641 atctgagtca atgtaagcat aagatgtttt tccagtcata atttcaatcc caaatctttt
5701 agacagaaat tctggacgta aatcttttgg tgaaagaatt tttttatgta gcaatatatc
5761 cgatacagca ccttctaaaa gcgttggtga atagggcatt ttacctatct cctctcattt
5821 tgtggaataa aaatagtcat attcgtccat ctacctatcc tattatcgaa cagttgaact
5881 ttttaatcaa ggatcagtcc tttttttcat tattcttaaa ctgtgctctt aactttaaca
5941 actcgatttg tttttccaga tctcgagggt aactagcctc gccgatcccg caagaggccc
6001 ggcagtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct
6061 aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat
6121 attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg
6181 cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg
6241 aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc
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7081 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
7141 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
7201 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
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7321 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
7381 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
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7501 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
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7621 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
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7801 ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta
7861 ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag
7921 tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcatgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pHT01枯草胞内质粒
别称: pHT-01
| 启动子: | Pgrac |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 广宿主系列，枯草杆菌载体 |
| 质粒大小: | 7956bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 枯草芽孢杆菌 |
| 诱导方式: | IPTG诱导 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7956 bp ds-DNA circular SYN 07-2-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7956)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-2-7 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7956
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 1239..1255
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS complement(1298..2380)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
protein_bind 2764..2788
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter 6033..6137
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 6138..6998
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 ttaagttatt ggtatgactg gttttaagcg caaaaaaagt tgctttttcg tacctattaa
61 tgtatcgttt tagaaaaccg actgtaaaaa gtacagtcgg cattatctca tattataaaa
121 gccagtcatt aggcctatct gacaattcct gaatagagtt cataaacaat cctgcatgat
181 aaccatcaca aacagaatga tgtacctgta aagatagcgg taaatatatt gaattacctt
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661 tatcaatttc tgtggttata ctaaaagtcg tttgttggtt caaataatga ttaaatatct
721 cttttctctt ccaattgtct aaatcaattt tattaaagtt catttgatat gcctcctaaa
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1021 ttatcttgat aataagggta actattgccg atcgtccatt ccgacagcat cgccagtcac
1081 tatggcgtgc tgctagcgcc attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc
1141 ggtgcgggcc tcttcgctat tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt
1201 aagttgggta acgccagggt tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt
1261 cgagctcagg ccttaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg
1321 aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg
1381 tattgggcgc cagggtggtt tttcttttca ccagtgagac gggcaacagc tgattgccct
1441 tcaccgcctg gccctgagag agttgcagca agcggtccac gctggtttgc cccagcaggc
1501 gaaaatcctg tttgatggtg gttaacggcg ggatataaca tgagctgtct tcggtatcgt
1561 cgtatcccac taccgagata tccgcaccaa cgcgcagccc ggactcggta atggcgcgca
1621 ttgcgcccag cgccatctga tcgttggcaa ccagcatcgc agtgggaacg atgccctcat
1681 tcagcatttg catggtttgt tgaaaaccgg acatggcact ccagtcgcct tcccgttccg
1741 ctatcggctg aatttgattg cgagtgagat atttatgcca gccagccaga cgcagacgcg
1801 ccgagacaga acttaatggg cccgctaaca gcgcgatttg ctggtgaccc aatgcgacca
1861 gatgctccac gcccagtcgc gtaccgtctt catgggagaa aataatactg ttgatgggtg
1921 tctggtcaga gacatcaaga aataacgccg gaacattagt gcaggcagct tccacagcaa
1981 tggcatcctg gtcatccagc ggatagttaa tgatcagccc actgacgcgt tgcgcgagaa
2041 gattgtgcac cgccgtttta caggcttcga cgccgcttcg ttctaccatc gacaccacca
2101 cgctggcacc cagttgatcg gcgcgagatt taatcgccgc gacaatttgc gacggcgcgt
2161 gcagggccag actggaggtg gcaacgccaa tcagcaacga ctgtttgccc gccagttgtt
2221 gtgccacgcg gttgggaatg taattcagct ccgccatcgc cgcttccact ttttcccgcg
2281 ttttcgcaga aacgtggctg gcctggttca ccacgcggga aacggtctga taagagacac
2341 cggcatactc tgcgacatcg tataacgtta ctggtttcat caaaatcgtc tccctccgtt
2401 tgaatatttg attgatcgta accagatgaa gcactctttc cactatccct acagtgttat
2461 ggcttgaaca atcacgaaac aataattggt acgtacgatc tttcagccga ctcaaacatc
2521 aaatcttaca aatgtagtct ttgaaagtat tacatatgta agatttaaat gcaaccgttt
2581 tttcggaagg aaatgatgac ctcgtttcca ccggaattag cttggtacca gctattgtaa
2641 cataatcggt acgggggtga aaaagctaac ggaaaaggga gcggaaaaga atgatgtaag
2701 cgtgaaaaat tttttatctt atcacttgaa attggaaggg agattcttta ttataagaat
2761 tgtggaattg tgagcggata acaattccca attaaaggag gaaggatcct ctagagtcga
2821 cgtccccggg gcagcccgcc taatgagcgg gcttttttca cgtcacgcgt ccatggagat
2881 ctttgtctgc aactgaaaag tttatacctt acctggaaca aatggttgaa acatacgagg
2941 ctaatatcgg cttattagga atagtccctg tactaataaa atcaggtgga tcagttgatc
3001 agtatatttt ggacgaagct cggaaagaat ttggagatga cttgcttaat tccacaatta
3061 aattaaggga aagaataaag cgatttgatg ttcaaggaat cacggaagaa gatactcatg
3121 ataaagaagc tctaaaacta ttcaataacc ttacaatgga attgatcgaa agggtggaag
3181 gttaatggta cgaaaattag gggatctacc tagaaagcca caaggcgata ggtcaagctt
3241 aaagaaccct tacatggatc ttacagattc tgaaagtaaa gaaacaacag aggttaaaca
3301 aacagaacca aaaagaaaaa aagcattgtt gaaaacaatg aaagttgatg tttcaatcca
3361 taataagatt aaatcgctgc acgaaattct ggcagcatcc gaagggaatt catattactt
3421 agaggatact attgagagag ctattgataa gatggttgag acattacctg agagccaaaa
3481 aactttttat gaatatgaat taaaaaaaag aaccaacaaa ggctgagaca gactccaaac
3541 gagtctgttt ttttaaaaaa aatattagga gcattgaata tatattagag aattaagaaa
3601 gacatgggaa taaaaatatt ttaaatccag taaaaatatg ataagattat ttcagaatat
3661 gaagaactct gtttgttttt gatgaaaaaa caaacaaaaa aaatccacct aacggaatct
3721 caatttaact aacagcggcc aaactgagaa gttaaatttg agaaggggaa aaggcggatt
3781 tatacttgta tttaactatc tccattttaa cattttatta aaccccatac aagtgaaaat
3841 cctcttttac actgttcctt taggtgatcg cggagggaca ttatgagtga agtaaaccta
3901 aaaggaaata cagatgaatt agtgtattat cgacagcaaa ccactggaaa taaaatcgcc
3961 aggaagagaa tcaaaaaagg gaaagaagaa gtttattatg ttgctgaaac ggaagagaag
4021 atatggacag aagagcaaat aaaaaacttt tctttagaca aatttggtac gcatatacct
4081 tacatagaag gtcattatac aatcttaaat aattacttct ttgatttttg gggctatttt
4141 ttaggtgctg aaggaattgc gctctatgct cacctaactc gttatgcata cggcagcaaa
4201 gacttttgct ttcctagtct acaaacaatc gctaaaaaaa tggacaagac tcctgttaca
4261 gttagaggct acttgaaact gcttgaaagg tacggtttta tttggaaggt aaacgtccgt
4321 aataaaacca aggataacac agaggaatcc ccgattttta agattagacg taaggttcct
4381 ttgctttcag aagaactttt aaatggaaac cctaatattg aaattccaga tgacgaggaa
4441 gcacatgtaa agaaggcttt aaaaaaggaa aaagagggtc ttccaaaggt tttgaaaaaa
4501 gagcacgatg aatttgttaa aaaaatgatg gatgagtcag aaacaattaa tattccagag
4561 gccttacaat atgacacaat gtatgaagat atactcagta aaggagaaat tcgaaaagaa
4621 atcaaaaaac aaatacctaa tcctacaaca tcttttgaga gtatatcaat gacaactgaa
4681 gaggaaaaag tcgacagtac tttaaaaagc gaaatgcaaa atcgtgtctc taagccttct
4741 tttgatacct ggtttaaaaa cactaagatc aaaattgaaa ataaaaattg tttattactt
4801 gtaccgagtg aatttgcatt tgaatggatt aagaaaagat atttagaaac aattaaaaca
4861 gtccttgaag aagctggata tgttttcgaa aaaatcgaac taagaaaagt gcaataaact
4921 gctgaagtat ttcagcagtt ttttttattt agaaatagtg aaaaaaatat aatcagggag
4981 gtatcaatat ttaatgagta ctgatttaaa tttatttaga ctggaattaa taattaacac
5041 gtagactaat taaaatttaa tgagggataa agaggataca aaaatattaa tttcaatccc
5101 tattaaattt taacaagggg gggattaaaa tttaattaga ggtttatcca caagaaaaga
5161 ccctaataaa atttttacta gggttataac actgattaat ttcttaatgg gggagggatt
5221 aaaatttaat gacaaagaaa acaatctttt aagaaaagct tttaaaagat aataataaaa
5281 agagctttgc gattaagcaa aactctttac tttttcattg acattatcaa attcatcgat
5341 ttcaaattgt tgttgtatca taaagttaat tctgttttgc acaacctttt caggaatata
5401 aaacacatct gaggcttgtt ttataaactc agggtcgcta aagtcaatgt aacgtagcat
5461 atgatatggt atagcttcca cccaagttag cctttctgct tcttctgaat gtttttcata
5521 tacttccatg ggtatctcta aatgattttc ctcatgtagc aaggtatgag caaaaagttt
5581 atggaattga tagttcctct ctttttcttc aactttttta tctaaaacaa acactttaac
5641 atctgagtca atgtaagcat aagatgtttt tccagtcata atttcaatcc caaatctttt
5701 agacagaaat tctggacgta aatcttttgg tgaaagaatt tttttatgta gcaatatatc
5761 cgatacagca ccttctaaaa gcgttggtga atagggcatt ttacctatct cctctcattt
5821 tgtggaataa aaatagtcat attcgtccat ctacctatcc tattatcgaa cagttgaact
5881 ttttaatcaa ggatcagtcc tttttttcat tattcttaaa ctgtgctctt aactttaaca
5941 actcgatttg tttttccaga tctcgagggt aactagcctc gccgatcccg caagaggccc
6001 ggcagtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct
6061 aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat
6121 attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg
6181 cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg
6241 aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc
6301 ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat
6361 gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact
6421 attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca
6481 tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact
6541 tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg
6601 atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg
6661 agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg
6721 aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg
6781 caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag
6841 ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc
6901 gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga
6961 tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat
7021 atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc
7081 tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag
7141 accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct
7201 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac
7261 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc
7321 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg
7381 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt
7441 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt
7501 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc
7561 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca
7621 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata
7681 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg
7741 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct
7801 ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta
7861 ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag
7921 tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcatgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4607/pCMV-SPORT6-GSTA4人源基因质粒 |
| P4608/pCMV-SPORT6-MAT1A（4同义突变）人源基因质粒 |
| P4609/pCMV-SPORT6-TPST1人源基因质粒 |
| P4610/pCMV-SPORT6-LBR人源基因质粒 |
| P4611/pCMV-SPORT6-ITGB1人源基因质粒 |
| P4612/pCMV-SPORT6-VOPP1人源基因质粒 |
| P4613/pCMV-SPORT6-TPP1（1点突变）人源基因质粒 |
| P4614/pCMV-SPORT6-PANX1-A15C人源基因质粒 |
| P4615/pCMV-SPORT6-ACOX3人源基因质粒 |
| P4616/pCMV-SPORT6-SOCS6人源基因质粒 |
| P4617/pCMV-SPORT6-HLA-DOA人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 2 给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质粒载体是由枯草芽孢杆菌隐性质粒与大肠杆菌质粒构成的穿梭载体，可在大肠杆菌中完成基因片段的连接克隆
pHT01 枯草杆菌质粒 Amp，Chl http://www.addgene.org/vector-database/5885/ pHT43 枯草杆菌质粒 Amp，Chl http://www.biofeng.com/zaiti/qita/pHT43.html pHT304
等）。上述方法中，实验室最常用的方法当属是脂质体转染（质粒转染）。 质粒转染操作简单，分为瞬时转染和稳定转染。针对不同属性细胞系，选择转让方式时要做足功课，千万不要图方便，否则转染效率简直崩溃。影响转染效率的因素有很多，比如准备不充分、转染条件不佳；再比如细胞株本身的特性和活性、细胞污染，转染的DNA/RNA的质量，转染方法，转染试剂的选择等，小编总结了这11个注意事项，一起来学习吧！ 01血清条件下的细胞转染 转染可以使用血清，前提是DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，否则会降低转染
pHT01枯草胞内质粒
￥100 - 1000
