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- 2025年07月15日
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- 详细信息
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pYIP5
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pYIP5酵母质粒
别称: pYIP5
质粒属性
质粒简介
pYIP5酵母质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5541 bp ds-DNA circular SYN 05-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pYIP5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5541)
AUTHORS zz
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5541
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 13..41
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
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/codon_start=1
/gene="tet"
/product="tetracycline efflux protein"
/note="TcR"
/note="confers resistance to tetracycline"
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GVLLALYALMQFLCAPVLGALS-DRFGRRPVLLASLLGATIDYAIMATTPVLWILYAGRI
VAGITGATGAVAGAYIADITDGEDRARHFGLMSACFGVGMVAGPVAGGLLGAISLHAPF
LAAAVLNGLNLLLGCFLMQESHKGERRPMPLRAFNPVSSFRWARGMTIVAALMTVFFIM
QLVGQVPAALWVIFGEDRFRWSATMIGLSLAVFGILHALAQAFVTGPATKRFGEKQAII
AGMAADALGYVLLAFATRGWMAFPIMILLASGGIGMPALQAMLSRQVDDDHQGQLQGSL
AALTSLTSITGPLIVTAIYAASASTWNGLAWIVGAALYLVCLPALRRGAWSRATST"
promoter 1445..1660
/gene="S. cerevisiae URA3"
/note="URA3 promoter"
CDS 1661..2464
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/note="URA3"
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
CDS 3098..3289
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/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
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/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(3717..4305)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4476..5336)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5337..5441)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gaattctcat gtttgacagc ttatcatcga taagctttaa tgcggtagtt tatcacagtt
61 aaattgctaa cgcagtcagg caccgtgtat gaaatctaac aatgcgctca tcgtcatcct
121 cggcaccgtc accctggatg ctgtaggcat aggcttggtt atgccggtac tgccgggcct
181 cttgcgggat atcgtccatt ccgacagcat cgccagtcac tatggcgtgc tgctagcgct
241 atatgcgttg atgcaatttc tatgcgcacc cgttctcgga gcactgtccg accgctttgg
301 ccgccgccca gtcctgctcg cttcgctact tggagccact atcgactacg cgatcatggc
361 gaccacaccc gtcctgtgga tcctctacgc cggacgcatc gtggccggca tcaccggcgc
421 cacaggtgcg gttgctggcg cctatatcgc cgacatcacc gatggggaag atcgggctcg
481 ccacttcggg ctcatgagcg cttgtttcgg cgtgggtatg gtggcaggcc ccgtggccgg
541 gggactgttg ggcgccatct ccttgcatgc accattcctt gcggcggcgg tgctcaacgg
601 cctcaaccta ctactgggct gcttcctaat gcaggagtcg cataagggag agcgtcgacc
661 gatgcccttg agagccttca acccagtcag ctccttccgg tgggcgcggg gcatgactat
721 cgtcgccgca cttatgactg tcttctttat catgcaactc gtaggacagg tgccggcagc
781 gctctgggtc attttcggcg aggaccgctt tcgctggagc gcgacgatga tcggcctgtc
841 gcttgcggta ttcggaatct tgcacgccct cgctcaagcc ttcgtcactg gtcccgccac
901 caaacgtttc ggcgagaagc aggccattat cgccggcatg gcggccgacg cgctgggcta
961 cgtcttgctg gcgttcgcga cgcgaggctg gatggccttc cccattatga ttcttctcgc
1021 ttccggcggc atcgggatgc ccgcgttgca ggccatgctg tccaggcagg tagatgacga
1081 ccatcaggga cagcttcaag gatcgctcgc ggctcttacc agcctaactt cgatcactgg
1141 accgctgatc gtcacggcga tttatgccgc ctcggcgagc acatggaacg ggttggcatg
1201 gattgtaggc gccgccctat accttgtctg cctccccgcg ttgcgtcgcg gtgcatggag
1261 ccgggccacc tcgacctgaa tggaagccgg cggcacctcg ctaacggatt caccactcca
1321 agaattggag ccaatcaatt cttgcggaga actgtgaatg cgcaaaccaa cccttggcag
1381 aacatatcca tcgcgtccgc catctccagc agccgcacgc ggcgcatccc cccccccctt
1441 tcaattcaat tcatcatttt ttttttattc ttttttttga tttcggtttc tttgaaattt
1501 ttttgattcg gtaatctccg aacagaagga agaacgaagg aaggagcaca gacttagatt
1561 ggtatatata cgcatatgta gtgttgaaga aacatgaaat tgcccagtat tcttaaccca
1621 actgcacaga acaaaaacct gcaggaaacg aagataaatc atgtcgaaag ctacatataa
1681 ggaacgtgct gctactcatc ctagtcctgt tgctgccaag ctatttaata tcatgcacga
1741 aaagcaaaca aacttgtgtg cttcattgga tgttcgtacc accaaggaat tactggagtt
1801 agttgaagca ttaggtccca aaatttgttt actaaaaaca catgtggata tcttgactga
1861 tttttccatg gagggcacag ttaagccgct aaaggcatta tccgccaagt acaatttttt
1921 actcttcgaa gacagaaaat ttgctgacat tggtaataca gtcaaattgc agtactctgc
1981 gggtgtatac agaatagcag aatgggcaga cattacgaat gcacacggtg tggtgggccc
2041 aggtattgtt agcggtttga agcaggcggc agaagaagta acaaaggaac ctagaggcct
2101 tttgatgtta gcagaattgt catgcaaggg ctccctatct actggagaat atactaaggg
2161 tactgttgac attgcgaaga gcgacaaaga ttttgttatc ggctttattg ctcaaagaga
2221 catgggtgga agagatgaag gttacgattg gttgattatg acacccggtg tgggtttaga
2281 tgacaaggga gacgcattgg gtcaacagta tagaaccgtg gatgatgtgg tctctacagg
2341 atctgacatt attattgttg gaagaggact atttgcaaag ggaagggatg ctaaggtaga
2401 gggtgaacgt tacagaaaag caggctggga agcatatttg agaagatgcg gccagcaaaa
2461 ctaaaaaact gtattataag taaatgcatg tatactaaac tcacaaatta gagcttcaat
2521 ttaattatat cagttattac ccgggaatct cggtcgtaat gatttttata atgacgaaaa
2581 aaaaaaaatt ggaaagaaaa gggggggggg gcagcgttgg gtcctggcca cgggtgcgca
2641 tgatcgtgct cctgtcgttg aggacccggc taggctggcg gggttgcctt actggttagc
2701 agaatgaatc accgatacgc gagcgaacgt gaagcgactg ctgctgcaaa acgtctgcga
2761 cctgagcaac aacatgaatg gtcttcggtt tccgtgtttc gtaaagtctg gaaacgcgga
2821 agtcagcgcc ctgcaccatt atgttccgga tctgcatcgc aggatgctgc tggctaccct
2881 gtggaacacc tacatctgta ttaacgaagc gctggcattg accctgagtg atttttctct
2941 ggtcccgccg catccatacc gccagttgtt taccctcaca acgttccagt aaccgggcat
3001 gttcatcatc agtaacccgt atcgtgagca tcctctctcg tttcatcggt atcattaccc
3061 ccatgaacag aaattccccc ttacacggag gcatcaagtg accaaacagg aaaaaaccgc
3121 ccttaacatg gcccgcttta tcagaagcca gacattaacg cttctggaga aactcaacga
3181 gctggacgcg gatgaacagg cagacatctg tgaatcgctt cacgaccacg ctgatgagct
3241 ttaccgcagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
3301 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
3361 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag
3421 cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat
3481 atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc
3541 gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct
3601 cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg
3661 tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc
3721 cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga
3781 aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct
3841 cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg
3901 gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag
3961 ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat
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4621 ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc
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4741 agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tgcaggcatc
4801 gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg
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4921 gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat
4981 tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag
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5101 aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg
5161 cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca
5221 cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga
5281 aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc
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5401 tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg
5461 ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc
5521 acgaggccct ttcgtcttca a
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pYIP5酵母质粒
别称: pYIP5
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | URA3 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | URA3 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pYIP5酵母质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5541 bp ds-DNA circular SYN 05-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pYIP5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5541)
AUTHORS zz
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5541
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YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
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replication"
CDS complement(4476..5336)
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related antibiotics"
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EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5337..5441)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gaattctcat gtttgacagc ttatcatcga taagctttaa tgcggtagtt tatcacagtt
61 aaattgctaa cgcagtcagg caccgtgtat gaaatctaac aatgcgctca tcgtcatcct
121 cggcaccgtc accctggatg ctgtaggcat aggcttggtt atgccggtac tgccgggcct
181 cttgcgggat atcgtccatt ccgacagcat cgccagtcac tatggcgtgc tgctagcgct
241 atatgcgttg atgcaatttc tatgcgcacc cgttctcgga gcactgtccg accgctttgg
301 ccgccgccca gtcctgctcg cttcgctact tggagccact atcgactacg cgatcatggc
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481 ccacttcggg ctcatgagcg cttgtttcgg cgtgggtatg gtggcaggcc ccgtggccgg
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1681 ggaacgtgct gctactcatc ctagtcctgt tgctgccaag ctatttaata tcatgcacga
1741 aaagcaaaca aacttgtgtg cttcattgga tgttcgtacc accaaggaat tactggagtt
1801 agttgaagca ttaggtccca aaatttgttt actaaaaaca catgtggata tcttgactga
1861 tttttccatg gagggcacag ttaagccgct aaaggcatta tccgccaagt acaatttttt
1921 actcttcgaa gacagaaaat ttgctgacat tggtaataca gtcaaattgc agtactctgc
1981 gggtgtatac agaatagcag aatgggcaga cattacgaat gcacacggtg tggtgggccc
2041 aggtattgtt agcggtttga agcaggcggc agaagaagta acaaaggaac ctagaggcct
2101 tttgatgtta gcagaattgt catgcaaggg ctccctatct actggagaat atactaaggg
2161 tactgttgac attgcgaaga gcgacaaaga ttttgttatc ggctttattg ctcaaagaga
2221 catgggtgga agagatgaag gttacgattg gttgattatg acacccggtg tgggtttaga
2281 tgacaaggga gacgcattgg gtcaacagta tagaaccgtg gatgatgtgg tctctacagg
2341 atctgacatt attattgttg gaagaggact atttgcaaag ggaagggatg ctaaggtaga
2401 gggtgaacgt tacagaaaag caggctggga agcatatttg agaagatgcg gccagcaaaa
2461 ctaaaaaact gtattataag taaatgcatg tatactaaac tcacaaatta gagcttcaat
2521 ttaattatat cagttattac ccgggaatct cggtcgtaat gatttttata atgacgaaaa
2581 aaaaaaaatt ggaaagaaaa gggggggggg gcagcgttgg gtcctggcca cgggtgcgca
2641 tgatcgtgct cctgtcgttg aggacccggc taggctggcg gggttgcctt actggttagc
2701 agaatgaatc accgatacgc gagcgaacgt gaagcgactg ctgctgcaaa acgtctgcga
2761 cctgagcaac aacatgaatg gtcttcggtt tccgtgtttc gtaaagtctg gaaacgcgga
2821 agtcagcgcc ctgcaccatt atgttccgga tctgcatcgc aggatgctgc tggctaccct
2881 gtggaacacc tacatctgta ttaacgaagc gctggcattg accctgagtg atttttctct
2941 ggtcccgccg catccatacc gccagttgtt taccctcaca acgttccagt aaccgggcat
3001 gttcatcatc agtaacccgt atcgtgagca tcctctctcg tttcatcggt atcattaccc
3061 ccatgaacag aaattccccc ttacacggag gcatcaagtg accaaacagg aaaaaaccgc
3121 ccttaacatg gcccgcttta tcagaagcca gacattaacg cttctggaga aactcaacga
3181 gctggacgcg gatgaacagg cagacatctg tgaatcgctt cacgaccacg ctgatgagct
3241 ttaccgcagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
3301 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
3361 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag
3421 cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat
3481 atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc
3541 gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct
3601 cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg
3661 tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc
3721 cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga
3781 aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct
3841 cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg
3901 gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag
3961 ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat
4021 cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac
4081 aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac
4141 tacggctaca ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc
4201 ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt
4261 tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc
4321 ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg
4381 agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca
4441 atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca
4501 cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag
4561 ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac
4621 ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc
4681 agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct
4741 agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tgcaggcatc
4801 gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg
4861 cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc
4921 gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat
4981 tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag
5041 tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat
5101 aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg
5161 cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca
5221 cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga
5281 aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc
5341 ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata
5401 tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg
5461 ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc
5521 acgaggccct ttcgtcttca a
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4594/pCMV-SPORT6-NRF1人源基因质粒 |
| P4595/pCMV-SPORT6-NELL2人源基因质粒 |
| P4596/pCMV-SPORT6-RECQL5人源基因质粒 |
| P4597/pCMV-SPORT6-SEMA4F人源基因质粒 |
| P4598/pCMV-SPORT6-TAF1A(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4599/pCMV-SPORT6-LRRC42人源基因质粒 |
| P4600/pCMV-SPORT6-BMX人源基因质粒 |
| P4601/pCMV-SPORT6-TRIM44人源基因质粒 |
| P4602/pCMV-SPORT6-SMARCAL1人源基因质粒 |
| P4603/pCMV-SPORT6-SP2（2同义突变）人源基因质粒 |
| P4604/pCMV-SPORT6-QARS人源基因质粒 |
| P4605/pCMV-SPORT6-TRMT2B人源基因质粒 |
| P4606/pCMV-SPORT6-SELENOK人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Pick colonies into 0.5ml of SD-Leu (or other appropriate SD medium)Vortex for 1minLeave to grow O/N for 18-24h at 30℃, 230-250rpm (best in 5ml bijou)Spin yeast culture at 13,000rpm for 5 min (microfuge)Pour off supernatant carefully and resuspend
问：想从酵母提取质粒，转化大肠杆菌，按分子克隆的方法，可能都线性化了，转化率为0，请问有什么好的办法？答：以下是我的方法，曾提过数百个，好像转化效率还可以,基本上都提出来了。个人体会是Lyticase的活性要好，而且涡流混匀这一步好像要尽量充分吧，u see，酵母质粒所以不好提，就是因为酵母细胞有很厚的细胞壁，再加上酵母质粒拷贝数目多少的问题，所以破壁一定要充分。其次吗？感受态细胞的状态也会有很大的影响……再有，如果担心酵母细胞的活性问题，也可以活化一下再提，不过好象我的实验中这项不是问题
问1：在提取酵母质粒的时候，有一步用到玻璃珠，谁能告诉我玻璃珠的作用，而且在哪能买到玻璃珠，贵不贵？谢谢！答1：在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。答2：玻璃珠SIGMA有，可以问问代理。也可以使用蜗牛酶裂解法破酵母细胞壁法。问2：能给我具体说说蜗牛酶裂解法的步骤吗？谢谢。另外你知道玻璃珠的作用吗？它应该是吸附酵母染色体DNA吧，而不是质粒DNA。你用过没有，它贵
pYIP5酵母质粒
￥100 - 1000
