pBT3-N膜蛋白双杂交质粒

基本信息
名称：pBT3-N膜蛋白双杂交质粒
别称: pBT3-N

启动子:	CYC1
复制子:	pBS
原核抗性:	Kan
筛选标记:	LEU2
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	酵母菌
载体用途：	杂交
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Kan
筛选标记：	LEU2
荧光蛋白：

质粒简介
   pBT3-N是一个膜蛋白酵母双杂交质粒。

质粒图谱


质粒序列
        1 tagtacgacg atcttcttag gggcagacat tagaatggta tatccttgaa atatatatat
       61 atatattgct gaaatgtaaa aggtaagaaa agttagaaag taagacgatt gctaaccacc
      121 tattggaaaa aacaataggt ccttaaataa tattgtcaac ttcaagtatt gtgatgcaag
      181 catttagtca tgaacgcttc tctattctat atgaaaagcc ggttccggcg ctctcacctt
      241 tcctttttct cccaattttt cagttgaaaa aggtatatgc gtcaggcgac ctctgaaatt
      301 aacaaaaaat ttccagtcat cgaatttgat tctgtgcgat agcgcccctg tgtgttctcg
      361 ttatgttgag gaaaaaaata atggttgcta agagattcga actcttgcat cttacgatac
      421 ctgagtattc ccacagttaa ctgcggtcaa gatatttctt gaatcaggcg ccttagaccg
      481 ctcggccaaa caaccaatta cttgttgaga aatagagtat aattatccta taaatataac
      541 gtttttgaac acacatgaac aaggaagtac aggacaattg attttgaaga gaatgtggat
      601 tttgatgtaa ttgttgggat tccattttta ataaggcaat aatattaggt atgtagatat
      661 actagaagtt ctcctcgacc ggtcgatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg
      721 agaaaatacc gcatcaggaa attgtaagcg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt
      781 tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat
      841 caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat
      901 taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac
      961 tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc
     1021 ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga
     1081 gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaggt gtagcggtca
     1141 cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtccattc
     1201 gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg
     1261 ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc
     1321 ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgagcgcgcg taatacgact cactataggg
     1381 cgaattgggt accggccgca aattaaagcc ttcgagcgtc ccaaaacctt ctcaagcaag
     1441 gttttcagta taatgttaca tgcgtacacg cgtctgtaca gaaaaaaaag aaaaatttga
     1501 aatataaata acgttcttaa tactaacata actataaaaa aataaatagg gacctagacc
     1561 ttcaggttgt ctaactcctt ccttttcggt tagagcggag ggtggggggg aggggcgtgt
     1621 atgtaagcgt gacataacta attacatgac ctattaagat ctgacgtcag cgctccgcgg
     1681 ttagctactt accatggggg ccaaagcggc cttaattaaa ggcctggccg taatggccct
     1741 gcaggaattc aaaatcaagc ttatcgaacc ggcc

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2857/pENTR223-RBBP4（2同义突变）人源基因质粒

P2858/pENTR223-FKBP8（179-1239bp）人源基因质粒

P2859/pENTR223-FAM172A人源基因质粒

P2860/pENTR223-TRNT1（88-1305bp）人源基因质粒

P2861/pENTR223-SERPINF1（2同义突变）人源基因质粒

P2862/pENTR223-PSMC4人源基因质粒

P2863/pENTR223-NKAP(2点突变）人源基因质粒

P2864/pENTR223-IKBKG人源基因质粒

P2865/pENTR223-CCDC91-G850A人源基因质粒

P2866/pENTR223-PELI2人源基因质粒

P2867/pENTR223-PHKG2人源基因质粒